Композиции с: Композиции из антуриумов — купить с бесплатной доставкой в Москве

Подготовка без вреда — яровой рапс и инсектофунгицидные композиции с включением регуляторов роста

Агрохимия Растениеводство 15 марта 2021

Текст: А. Ф. Судник, Институт экспериментальной ботаники им. В. Ф. Купревича НАН Беларуси; В. И. Кочурко, Е. Э. Абарова, Е. М. Ритвинская, УО «Барановичский государственный университет»

Подавляющее число заболеваний сельскохозяйственных растений передается через семенной материал. Повысить жизнеспособность семян, обеззаразить их от многочисленных возбудителей, а также увеличить всхожесть позволяет обработка защитно-стимулирующими комплексами.

Сегодня в связи с глобальным загрязнением окружающей среды ужесточаются требования к токсичности и объемам применения средств защиты. По этой причине одним из перспективных является направление по созданию композиций на основе пестицидов, биологически активных веществ и микроудобрений.

СНИЗИТЬ ДОЗУ

Целенаправленное воздействие на семена является наиболее важным, экономически выгодным, экологически безопасным приемом защиты проростков от семенной, почвенной и раннесезонной аэрогенной инфекции. Обработка позволяет повысить устойчивость растений к абиотическим стрессорам. Экологичность этого приема заключается в том, что в расчете на гектар вносится небольшое количество действующего вещества, быстро разлагающегося в почве и отсутствующего в конечной продукции. Важно отметить, что доля активных компонентов, например фунгицидов, достигающих целевого объекта, то есть патогена, при влиянии на листья в период вегетации составляет, как правило, 0,03%, а при предпосевной обработке семян — в 100 раз больше.

Использование смесей на основе пестицидов, биоактивных элементов и микроудобрений позволяет снизить дозы химических препаратов без существенной потери биологической и хозяйственной эффективности, снять стрессорное влияние на растения химических компонентов и неблагоприятных погодных условий. Однако в этом случае речь не может идти о простом смешивании веществ разных классов, поскольку приготовленный таким образом состав не обеспечит ожидаемый результат. Пригодность препаратов для борьбы с заболеваниями растений, в том числе путем протравливания семян, определяется рядом условий, прежде всего их хемотерапевтическими индексами. Этот показатель представляет собой отношение минимальной губительно действующей на вредителя дозы средства к максимально безопасному для посевов объему. Композиции с индексом в единицу не подходят, так как они одинаково вредны и для паразита, и для культуры. Чем ближе данное значение к нулю, тем больше смесь соответствует назначению. Необходимы глубокие исследования, обосновывающие создание эффективных составов с низким хемотерапевтическим индексом и технологии их применения.

ВЛИЯНИЕ ФИТОГОРМОНОВ

Сегодня для предпосевной обработки семян широкое распространение получают инсектофунгицидные композиции с включением регуляторов роста. Большой спектр физиологического действия брассиностероидов определяет их ярко выраженный защитный эффект при влиянии различных по природе стрессовых факторов, что делает их привлекательными для практического применения в растениеводстве. Стероидные фитогормоны повышают устойчивость видов к низкой и высокой температуре, засухе, водному стрессу, засолению и аноксии. Кроме того, они контролируют поступление ионов в клетки, предотвращая накопление тяжелых металлов и радиоактивных элементов в растениях, произрастающих в зонах загрязнения поллютантами, а также обладают значительной бактерицидной и фунгицидной активностью. Все это в совокупности предполагает их участие в регуляции формирования неспецифических адаптивных механизмов.

В связи с этими свойствами специалисты двух научных учреждений провели исследование, основной целью которого стало изучение особенностей действия брассиностероидов в составе разработанных инсектофунгицидных композиций на физиологическое состояние растений ярового рапса, а также определение их устойчивости и продуктивности. Объектами научной работы служили семена и проростки сорта Гермес.

СПЕЦИАЛЬНЫЕ ТЕХНОЛОГИИ

В рамках исследования от черной ножки и плесневения семенной материал обрабатывался защитно-стимулирующими составами, разработанными на основе аналогов фунгицидного протравителя «ТМТД» с действующим веществом тирамом в объеме 400 г/л и нормой расхода 6 л на 10 л воды для одной тонны семян путем инкрустации пленкообразующим раствором поливинилацетата. Химические соединения фунгицидного действия, то есть тирам в дозах, рекомендованных для эталона «ТМТД», — 2400 и 1800 г/т, были растворены в однопроцентной смеси непластифицированной поливинилацетатной дисперсии. Далее в композицию вносились имидаклоприд в количестве 1200 г/т семян и состав брассиностероидов — эпи- и гомобрассинолида (ЭБ + ГБ, 10–6 М, или 10 (5 + 5) мг/т). Расход рабочей жидкости составил 10 л/т. Контролем служило сырье, не подвергавшееся воздействию исследуемых препаратов и обработанное эталоном «ТМТД».

Проращивание семян на фильтровальной бумаге и оценка качества посевного материала осуществлялись по ГОСТ 12038–84 и общеизвестной методике, в рулонах — по ГОСТ 12038–84 и модифицированной схеме для плоских и мелких зерен. Также проводился анализ физиологического состояния проростков. Низкотемпературный стресс для них создавался по специально разработанной технологии. Закладка полевых опытов выполнялась по общепринятым методикам. Интенсивность развития болезней и повреждение вредителями определялись на естественном инфекционном фоне. В течение вегетации посевов ярового рапса осуществлялись фенологические наблюдения, а также учет высоты растений и основных элементов структуры урожайности, то есть количество стручков и семян в них, вес 1000 зерен, масса семян с одного растения и тому подобное. Урожайность культуры устанавливалась с помощью обмолота, а убранная продукция пересчитывалась на чистоту в 100% и влажность на уровне 10%.

ОЦЕНИТЬ ВЛИЯНИЕ

В лабораторных условиях были изучены особенности воздействия на посевные качества семян разработанных защитно-стимулирующих составов, включавших аналоги фунгицида-протравителя «ТМТД» в 100 и 75% от рекомендованной дозы, инсектицид имидаклоприд и смесь ЭБ + ГБ в объеме 10 мг/т сырья. Также оценивалось физиологическое состояние формирующихся на 5–12 день проростков ярового рапса в оптимальном режиме и под воздействием низкотемпературного стресса.

В подходящих условиях тирам и пестицидные составы не оказывали значительного влияния на посевные качества семян и процессы развития проростков. При низкотемпературном стрессе выживаемость снижалась примерно на 15%, а у сохранившихся экземпляров наблюдалось вытягивание гипокотилей в длину. Тем не менее была выявлена эффективность смеси ЭБ и ГБ в составе инсектофунгицидных композиций. Например, при обработке составом тирама в дозе 75%, имидаклоприда и ЭБ + ГБ посевные качества материала не изменялись, но вытягивались гипокотили и увеличивалась масса проростков. В результате в этом варианте относительно эталона масса корней оказалась выше на 35,1%, длина и вес гипокотилей — на 17,3 и 9,1% соответственно. В условиях холодового стресса количество выживших экземпляров не только не снижалось, но и достоверно возрастало на 8,7%, при этом масса корня у них была на 34,8% больше, а семядолей — на 31,3%.

СДЕРЖАТЬ РАСПРОСТРАНЕНИЕ

В полевых опытах изучались особенности влияния на рост и развитие растений разработанных защитно-стимулирующих составов, включавших аналог фунгицида-протравителя «ТМТД», инсектицид имидаклоприд и смесь ЭБ + ГБ в указанных ранее дозировках. Кроме того, оценивались устойчивость к болезням, вредителям и продуктивность.

В результате фитопатологических обследований были выявлены распространение пероноспороза на уровне 100%, а также поражение растений черной ножкой. Интенсивность инфицирования последним заболеванием на контрольном варианте составила 8,4%, тогда как при использовании эталона «ТМТД» — 1,8%. Биологическая эффективность препарата по отношению к возбудителям этой болезни равнялась 78,5%. Применение разработанного инсектофунгицидного состава со сниженной на 25% по отношению к рекомендованной дозой тирама привело к увеличению распространения инфекции на 1% по сравнению с результатами при обработке «ТМТД» — 2,8%. Однако добавление в эту композицию смеси ЭБ + ГБ в дозе 10 мг/т семян позволило сдержать заболевание практически на уровне эталонной схемы — 2,1%. Биологическая эффективность комплекса по отношению к возбудителям черной ножки составляла 75%. Интенсивность поражения пероноспорозом на контрольном и опытных вариантах с применением фунгицидных и инсектицидных соединений равнялась примерно 15%. Тирам оказался не предназначен для защиты от этого заболевания, тогда как включение смеси ЭБ + ГБ в дозе 10 мг/т семян в композицию со сниженной на 25% дозой этого вещества по отношению к рекомендованной норме позволило сдержать развитие болезни — 12,6%.

В результате энтомологических обследований было установлено, что основным вредителем всходов являлись крестоцветные блошки. Их численность на контрольном и обработанном «ТМТД» вариантах составила 2–8 экз/кв. м, а в среднем — 4 и 4,3 экз/кв. м соответственно, поврежденность растений — 10–40%, причем обычный показатель оказался на уровне 30%. В ходе исследования была выявлена эффективность инсектицидного действия имидаклоприда в составе разработанных композиций. На вариантах с их использованием без добавления смеси ЭБ и ГБ и с ней количество жуков достигало 1–6 экз/кв. м, а в среднем — 3,1 и 2,7 экз/кв. м соответственно. При этом поврежденность растений равнялась 10–30%, в основном 15%. Таким образом, распространенность листоедов снизилась в два раза на начальных этапах развития культуры, когда она была наиболее уязвимой.

РЕЗУЛЬТАТИВНОСТЬ СОСТАВОВ

В исследованиях было установлено, что «ТМТД» незначительно уменьшал полевую всхожесть семян — с 83,3 до 80,5%. Также наблюдалась тенденция к снижению высоты растений на начальных фазах всходов и стеблевания, при этом их масса сокращалась только в первый период на 32,7%, а в дальнейшем — увеличивалась. Данные изменения не сказались на урожайности культуры. По сравнению с показателями при использовании «ТМТД» внесение состава с 75% от необходимой дозы тирама совместно с имидаклопридом и ЭБ + ГБ в объеме 10 мг/т полевая всхожесть семян увеличилась на 3,1%, то есть с 80,5 до 83,6%. Высота растений на разных фазах — всходов, стеблевания, цветения и образования стручков — стала больше на 42, 27,9, 14,9 и 6%, а их масса — на 171, 85,7, 20 и 19% соответственно. Урожайность повысилась на 14,2%, или 2,8 ц/га, за счет возрастания количества продуктивных побегов к уборке на 7,1% и массы 1000 зерен на 8,4%.

Таким образом, проведенные специалистами исследования особенностей действия разработанных защитно-стимулирующих составов для инкрустации семян помогли выявить способность брассиностероидов снижать негативное влияние пестицидов на развитие проростков, особенно в условиях низкотемпературного стресса. Кроме того, была установлена результативность применения инсектофунгицидной композиции для протравливания семенного материала и экспериментально проверена возможность сокращения рекомендуемой дозы фунгицида с тирамом в качестве действующего вещества на 25% в комбинированных смесях с фиторегуляторами без существенного уменьшения биозащитного эффекта против возбудителей черной ножки. При этом биологическая продуктивность комплекса составила 75% против 78,5% при обработке эталоном «ТМТД». В итоге разработанные смеси могут быть рекомендованы для практического применения на сельскохозяйственных предприятиях.

Сет-дизайн в интерьере или как создавать композиции с винтажными предметами.

Все, кто так или иначе связан с индустрией дизайна или следит за мировыми тенденциями, наблюдает в последние десятилетия переосмысление отношения к вещам. Это выражается в стремлении к сокращению потребления, популярности продуктов переработанного дизайна. В связи с этим мы наблюдаем бум на винтаж. Скажем честно, нам по душе эта тенденция, потому что особый стиль студии Balcon связан с тем, что мы уделяем особое внимание индивидуальности клиента, чтобы проектировать интерьеры с характером. Как правило, это означает наличие в интерьере предметов с историей.
Хотим поделиться с вами некоторыми секретами, как создать вдохновляющее пространство, которое сочетает элементы классики и современности.

1. Эклектика. Сочетайте ультрасовременные бренды с предметами разных эпох. Удивительно, но это заставляет оставаться свежими и динамичными и те, и другие.

2. Диалог. Особое искусство, когда предметы вступают друг с другом в диалог, это большая удача нащупать эти предметы, иногда композиции складываются мгновенно, а иногда спустя годы и благодаря перемещению предметов в пространстве.

3. Кино. Представьте, что вы снимаете фильм и продумываете дизайн квартиры своего героя. Учитывайте все детали: где он работает, в каких магазинах делает покупки, какую музыку слушает, как развлекается.

4. Главные герои. Продолжая тему кино, определитесь с «главными героями» в интерьере, вокруг этих предметов будет строиться интерьер, и разыгрываться сюжет.

5. Поддержка. Сочетание мебели и декора разных эпох часто является частью очарования комнаты, но важно сохранять целостный вид. То есть определиться с константами, которые станут фоном для «главных героев». Например, это может быть краска для стен и отделка из светлого дерева или одинаковая фурнитура.

6. Визуальный опыт. Имея желание, всегда можно найти предметы, которые заговорят в вашем интерьере. Если вам нравится коллекционный предмет дизайна прошлых лет, но пока вы не можете его себе позволить, присмотритесь, поймите, что именно вас привлекает и попробуйте найти альтернативные варианты. Удача вам обязательно улыбнется.

7. Ключ. Основные места в поиске винтажных вещей – местные рынки, магазины и сайты, где продают не новые вещи. Если вы не можете найти что-то стоящее там, есть международные сайты: Chairish, Etsy, eBay, Pamono, и 1stDibs.

8. Интуиция. Доверяйте своим ощущениям и со временем всё встанет на свои места. Веселитесь, пусть ваш дом развивается вместе с вами. Не пытайтесь всё просчитать, интерьер – живой организм, в нем есть место разным приемам и предметам.

25.02.2021
Марьяна Сорокина.

GET THE LOOK. Коллекция Pure Line — композиции с новой…

PERSONAL DATA PROTECTION

Data Controller

Noken Design, S.A.Ctra. Villarreal — Puebla Arenoso (CV 20, km 2), in 12540 Vila-real (Castellón), Spain

Tel: +34 964 506 450

www.noken.com

Purpose of the processing

To maintain the commercial relationship established as well as to keep you informed by means of electronic commercial communications about our products and services.

Retention time

On the one hand, tax and accounting information will be HELD FOR THE TERMS REQUIRED to comply with legal obligations.

In connection with the sending of advertising, we will be able to retain your information and send you advertising unless and until you oppose this.

Legal authority

Existence of a contractual relationship, legitimate interest, and consent, depending on each purpose and possible transfer.

Intended recipients of the data (transfers or assignments)

— Your personal details may be transferred to Group companies when you authorize this to receive advertising.

The companies making up Porcelanosa Grupo (including all the members in our business Group) are listed in the following links: www.porcelanosa.com/empresas.php and www.porcelanosa.com/buscador-de-tiendas.php

— Your details may be notified or transferred, as appropriate, to banking institutions for collections and payments, as well as at the request of Public Administrations or Courts.

— Your details may be transferred to the other companies in the Group whose activities are related to the product acquired.

DPO

You can contact the Data Protection Officer at PORCELANOSA Grupo either by sending an email to the following address: [email protected] or by telephoning 964 507 140

Rights

You may exercise the legal rights to Access, Correct, Cancel your details, request Portability, Elimination or, where appropriate, Oppose their use. In order to exercise these rights you must write to the address indicated above.

You must specify which of these rights you wish to exercise and, at the same time, accompany a photocopy of your ID card or equivalent identification document. If you are acting by means of a representative, whether for legal or voluntary reasons, you must also provide a document setting out the powers of representation and the ID document of your proxy.

Furthermore, you may exercise your right to personal data protection by lodging a complaint with the Spanish Data Protection Agency (www.agpd.es).

LEGAL CLAUSE FOR NEWSLETTERS AND DATA COLLECTION FORMS.

In accordance with the provisions contained in the current regulations on Personal Data Protection, you are hereby informed that the personal details you have provided will be included in a file for which the Data Controller is Noken Design, S.A. (Tax ID card nº A12556148 and registered office at Ctra. Villarreal — Puebla Arenoso (CV 20, km 2) in 12540 Vila-real (Castellón), Spain) in order to process your subscription request and build to send you information of interest from time to time, keeping you informed by means of electronic commercial communications about our products and services.

Your personal details may be assigned to the companies in Porcelanosa Grupo (including all the members of our business Group) belonging to the sector for the manufacture and sale of materials for construction, decoration and accessories (listed at www.porcelanosa.com/empresas.php and at www.porcelanosa.com/buscador-de-tiendas.php) for the same purpose but only if you authorize this by marking the following box.
I wish to receive advertising

Our legal authority derives from the existence of a contractual relationship, legitimate interest, and consent, depending on each purpose and possible transfer.
In accordance with the rights granted to you under current data protection regulations, you may exercise your legal rights to Access, Correction, Portability, Limitation of processing, Elimination or, where appropriate, Opposition to the use of your data as explained in the additional information.

Additional information: you can consult additional detailed information about Data Protection on our web site: www.porcelanosa.com/legal.php.

Пейзажные композиции с Дэвидом Нотоном

Печать изображения

Потрясающий уровень детализации в композициях лучше всего передают широкоформатные принтеры, такие как Canon imagePROGRAF PRO-4000. Композиции, созданные Дэвидом с помощью камеры Canon EOS R, были затем обработаны в программе Digital Photo Professional и улучшены с помощью нового программного решения для печати от Canon — Professional Print & Layout. Эта программа оснащена функцией печати DPRAW, которая обеспечивает печать в высоком разрешении, а также функцией печати HDR, которая позволяет выполнять точную настройку светлых участков изображений с высоким уровнем контрастности.

«С помощью этой программы мне удалось повысить уровень детализации в светлых участках изображений, включая засвеченные участки, и расширить общий тональный диапазон печатных изображений, — говорит он. — Разница между изображениями «до» и «после» просто невероятна. В итоге я получил сверхчеткие печатные изображения с потрясающим уровнем детализации; отчасти их качество обусловлено способом их создания, но также впечатляющим тональным диапазоном».

Дэвид самостоятельно печатает многие из своих фотографий на принтере Canon imagePROGRAF PRO-1000. «Он обеспечивает превосходное качество изображения, — говорит он. — 12-цветная система чернил отвечает за передачу всех оттенков и тонов цвета, включая глубокие оттенки черного».

По словам Дэвида, возможность печати панорамных изображений на моделях Canon imagePROGRAF PRO-1000 и CANON IMAGEPROGRAF PRO-300 является ценным преимуществом настольных профессиональных принтеров Canon. «Панорамные изображения выглядят далеко не так здорово в Instagram и других социальных сетях, но зато прекрасно смотрятся в виде печатных версий большого формата». «Демонстрируя печатные версии изображений заказчикам или зрителям, вы сможете сильнее впечатлить их, чем с помощью фотографий на экране».

Сухаиб Хусейн, эксперт по печати Canon, отмечает технические преимущества функции печати панорамных изображений. «Она позволяет сохранить широкий формат изображений без необходимости в обрезке, печати с рамкой или изменении соотношения сторон, — говорит он.

— Теперь пользователи могут в меню пользовательских настроек выбирать для длины отпечатка необходимые значения, а максимальная длина составляет 990,6 мм (CANON IMAGEPROGRAF PRO-300) или 1200 мм (Canon imagePROGRAF PRO-1000). На предыдущих моделях максимальная длина была ограничена 676 мм. Принтеры также поддерживают носители для панорамной печати, к примеру бумагу от Hahnemühle, размером до 594×210 мм. Большее значение максимальной длины печати позволяет размещать на одном участке бумаги больше изображений для оптимального расхода чернил и носителя».

Дэвид говорит, что конечная версия изображений стоит всех усилий, затраченных на их создание. «Я все еще считаю, что возможность с помощью программы создать одно изображение из нескольких, затем посмотреть его на экране и распечатать — это фантастика, — говорит он. — Даже после стольких лет пейзажной съемки это мотивирует меня ничуть не меньше, чем раньше».

NWZ-S760 Series | Воспроизведение композиций с помощью функции “Каналы SensMe™”

Воспроизведение композиций с помощью функции “Каналы SensMe™”

С помощью выбора отдельного канала можно воспроизводить композиции с учетом настроения, текущей деятельности или времени суток и т.д.

1. В меню Главное выберите [Каналы SensMe™].

2. Для выбора требуемого канала нажмите /.

Совет

• При изменении каналов композиции, проанализированные с помощью параметра [Обновление каналов], воспроизводятся с того места, которое обычно звучит через 45 секунд после начала композиции. Если продолжительность композиции меньше 90 секунд, воспроизведение начинается примерно с середины.

• При переносе композиций с помощью Media Go они будут воспроизводиться, начиная с наиболее мелодичной и ритмичной части.

Примечание

• Некоторые композиции не удастся проанализировать с помощью приложения 12 TONE ANALYSIS программного обеспечения Media Go в зависимости от формата файлов. Для этих файлов выполните процедуру [Обновление каналов] в меню параметров [Подробно].

• В соответствии с анализом композицию можно выбрать в нескольких каналах или нельзя выбрать совсем. При выборе канала [Произвол.-Все] можно воспроизводить все композиции.

Список каналов

Канал	Описание
[Утром]	Воспроизведение музыки для разного времени суток.
[Днем]
[Вечером]
[Ночью]
[В полночь]
[Произвол.-Все]	Воспроизведение всех композиций в случайном порядке.
[Энергичная]	Воспроизведение быстрых и энергичных композиций.
[Успокаивающая]	Воспроизведение спокойной и расслабляющей композиции.
[Радостная]	Воспроизведение энергичных и радостных композиций.
[Спокойная]	Воспроизведение грустных и медленных композиций.
[Лаундж]	Воспроизведение джаза и легкой музыки.
[Эмоциональная]	Воспроизведение баллад.
[Танцевальная]	Воспроизведение ритмичных композиций, рэп-музыки и композиций в стиле “ритм и блюз”.
[Экстремальная]	Воспроизведение резких и мощных композиций.

Примечание

• Каналы, не содержащие композиций, не отображаются в списке.

• Для воспроизведения с использованием режима [Утром], [Днем], [Вечером], [Ночью] или [В полночь] в соответствии с расписанием необходимо настроить параметр [Уст. даты/времени] [Подробно]. Если параметр [Уст. даты/времени] не настроен, будет выбран режим [Утром].

• При воспроизведении канала на основе времени этот канал не перейдет к следующему каналу на основе времени, даже если заданное для него время уже прошло. Для прослушивания следующего канала на основе времени переключитесь на другой канал и вернитесь обратно.

• Если для режима [Утром], [Днем], [Вечером], [Ночью] или [В полночь] не выбрано ни одной композиции, все композиции в данных каналах будут воспроизводиться в случайном порядке.

Композиции с цветами Archives — Buket-Buffet.ru

Главная / Композиции с цветами

Цветочные композиции из живых цветов — приятный презент к празднику, украшение дома или офиса. По сравнению с обычными букетами композиции имеют несколько преимуществ.
5 причин купить композицию из цветов
1. Композиции стоят дольше за счёт влажной губки установленной под цветами. Уход за цветами не сложный, нужно поливать композицию по мере высыхания губки.
2. Цветочные композиции смотрятся красивее за счёт большего количества цветов, удачных комбинаций и декора.
3. Букет увядает, остаются только фото. Цветочная композиция часто стоит в корзине, вазе. После увядания цветов тара используется дальше, напоминает о вашем подарке.
4. Композиции подходят к любому случаю. Личные и профессиональные праздники не обходятся без живых цветов.
5. Живые цветы комбинируют со сладостями, игрушками, фруктами. Заказать разработку авторской композиции легко.
Композиции из цветов: варианты
Существует сотни вариантов композиций из растений. Есть готовые решения, они пользуются популярностью у всех, считаются универсальным вариантом. Цветочные композиции из живых цветов под заказ – вариант удивить свою женщину.
Неважно перед вами коллега, родственница, жена или девушка, каждая по достоинству оценит персональную композицию. Задача флориста – помочь вам с выбором цветов по сезону или предпочтениям и оформить красивую композицию.
Авторские композиции красивы, компактны и недорогие. За счёт выбора оптимальных цветов и декора есть возможность выбирать, сколько потратить на цветы.
Купить композицию из цветов так же легко, как букет в цветочном магазине. Отличие флориста и обычного продавца в опыте работы и заинтересованности результатом. Задача продавца – продать как можно больше цветов вне зависимости подходят они для букета, композиции или нет.
Флорист подбирает цветы по цвету, текстуре, количеству, периоду хранения в срезанном виде и запаху. Существуют растения, очень красивы по внешнему виду, но с едким запахом. Такой букет может быть причиной аллергии, головных болей и даже отравления.
На основе активного диалога с заказчиком флорист выбирает цветы для композиции, которые подходят по всем пунктам. Цветы не должны раздражать, доставлять дискомфорт и влиять на здоровье. В особенности к ароматным цветам с осторожностью стоит отнестись аллергикам, людям, не переносящим резких запахов.
Выбор цветов по периоду их хранения в срезанном виде позволяет создать композицию, которая долго простоит. Согласитесь, приятно, когда подаренные цветы стоят неделями и напоминают о вас получателю каждый день.
Цветочные композиции заказывают не только на подарок. Цветы украшают корпоративы, профессиональные застолья, рицепшен и комнату для переговоров. Композиции из готовых цветов можно назвать универсальным способом, порадовать близких людей или внести в интерьер новые краски.
Свяжитесь с нашими специалистами сейчас, сделайте заказ или получите консультацию по теме.

Отображение 1–12 из 63

• Композиция с цветами №01

  2,500.00руб. В корзину

• Композиция с цветами №02

  2,500.00руб. В корзину

• Композиция с цветами №03

  2,500.00руб. В корзину

• Композиция с цветами №04

  2,500.00руб. В корзину

• Композиция с цветами №05

  2,500.00руб. В корзину

• Композиция с цветами №06

  2,500.00руб. В корзину

• Композиция с цветами №07

  2,500.00руб. В корзину

• Композиция с цветами №08

  2,500.00руб. В корзину

• Композиция с цветами №09

  2,500.00руб. В корзину

• Композиция с цветами №10

  2,500.00руб. В корзину

• Композиция с цветами №11

  2,500.00руб. В корзину

• Композиция с цветами №12

  2,500.00руб. В корзину

Композиции из шаров с доставкой по Москве от Шармандии

Фигуры из воздушных шариков или композиции из воздушных шаров  — одни из самых популярных элементов оформления. И это не удивительно! Простор для фантазии настолько велик, что и заказчику, и оформителю есть, где развернуться. Однако, есть некоторые виды оформления, самые распространенные и любимые всеми.

Композиции из шаров на свадьбу призваны подчеркнуть всю нежность и трогательность происходящего. Сердце из шаров на свадьбу – это вечная классика. Одно или два сердца из шаров в любом помещении создадут необходимую атмосферу романтики и торжества. Еще один эффектный и популярный элемент свадебного оформления – это лебеди из воздушных шаров. Две (реже одна) прекрасные птицы олицетворяют то самое главное чувство, которое объединяет молодых, становятся символом их преданности и верности друг другу. Также свадьбу могут украсить два переплетенных кольца из шаров за спинами молодых, напоминающих о важном решении в жизни влюбленных – прожить жизнь вместе и разделить друг с другом все хорошее и плохое, что их ожидает.

Но, если лебеди на свадьбу из шаров должны сообщать всем присутствующим трогательное и трепетное чувство, то совсем другое дело, когда речь идет об оформлении шарами детского праздника. Тут и клоун из воздушных шаров, и пальма из шариков – все собирается с единственной целью – у детей должны гореть глаза. Любой праздник для ребенка – это маленькая сказка, и фигуры из шариков помогут создать нужную атмосферу. Пальма из воздушных шаров превратит помещение в настоящие джунгли. Любое другое дерево из шаров в количестве нескольких штук – в глазах ребенка это уже волшебный лес, а цветы из воздушных шаров  — дивный сад.

Есть еще множество праздников, которые композиции из шаров  способны оживить и волшебным образом преобразить. Цифры из воздушных шаров будут уместны на любой годовщине, а арка из воздушных шаров это самый универсальный элемент оформления.

Человеческая фантазия безгранична, но главное, для чего создается любой элемент оформления, даже самая малюсенькая ромашка из шаров, – это Ваши улыбки, радость и положительные эмоции.

Определение композиции по Merriam-Webster

состав | \ ˌKäm-pə-ˈzi-shən \ 1а : акт или процесс составления конкретно : расположение в определенной пропорции или соотношении, особенно в художественной форме уникальная композиция картины

б (1) : расположение шрифта для печати состав руки

(2) : изготовление шрифтов или типографских знаков (как в фотокомпозиции), предназначенных для печати

2а : способ составления чего-либо

б : общий макияж меняющийся этнический состав населения города

c : качественный и количественный состав химического соединения. химический состав полимера

3 : взаиморасчет или соглашение Две партии составили композицию.

4 : продукт смешивания или комбинирования различных элементов или ингредиентов. смесь резины и пробки

5 : интеллектуальное творение: например,

а : кусок письма особенно : школьное упражнение в форме краткого сочинения написал сочинение о роли полиции в нашем обществе

б : музыкальное произведение, особенно значительного размера и сложности. На сольном концерте прозвучала ее композиция для фортепиано и флейты.

6 : качество или состояние соединения

Хэнлон, Дон: 9780470053645: Амазонка.com: Книги

Архитектура

Используйте образцы архитектурной композиции, чтобы вдохновить творческий дизайн

В Композиции в архитектуре Дон Хэнлон предлагает студентам захватывающе оригинальный путь к открытию архитектурной композиции, который избегает традиционного выбора между теория и практика. Изучая основные шаблоны организации в архитектуре, эта книга позволяет читателю связать теорию архитектуры с процессом проектирования.Связав то, что происходит в дизайн-студии, с тем, как архитектор думает об архитектурной композиции, этот подход стимулирует творческое мышление.

На примерах из разных культур и исторических периодов — от знаменитых до малоизвестных — автор раскрывает универсальные композиционные стратегии, которые можно использовать для решения конкретных архитектурных задач. Читатели узнают:

• Пять формальных свойств композиции — число, геометрия, пропорции, иерархия и ориентация

• Как план передает центральную организационную стратегию здания

• Типологическое сходство архитектурных форм, которые пересекая культурные, социальные, исторические и географические границы

Обогащенный графическим подходом, который понравится учащимся визуально, Композиции в архитектуре раскрывает формальные структуры в архитектуре во всем мире, а также на протяжении веков и вдохновляет архитекторов превращать абстрактные идеи в реальный дизайн.

Архитектура

Используйте образцы архитектурной композиции, чтобы вдохновить творческий дизайн

В Композиции в архитектуре Дон Хэнлон предлагает студентам захватывающе оригинальный путь к открытию архитектурной композиции, который избегает традиционного выбора между теория и практика. Изучая основные шаблоны организации в архитектуре, эта книга позволяет читателю связать теорию архитектуры с процессом проектирования.Связав то, что происходит в дизайн-студии, с тем, как архитектор думает об архитектурной композиции, этот подход стимулирует творческое мышление.

На примерах из разных культур и исторических периодов — от знаменитых до малоизвестных — автор раскрывает универсальные композиционные стратегии, которые можно использовать для решения конкретных архитектурных задач. Читатели узнают:

• Пять формальных свойств композиции ― число, геометрия, пропорции, иерархия и ориентация

• Как план передает центральную организационную стратегию здания

• Типологическое сходство архитектурных форм, которые пересекая культурные, социальные, исторические и географические границы

Обогащенный графическим подходом, который понравится учащимся визуально, Композиции в архитектуре раскрывает формальные структуры в архитектуре во всем мире, а также на протяжении веков и вдохновляет архитекторов превращать абстрактные идеи в реальный дизайн.

Об авторе

Дон Хэнлон — профессор архитектуры Висконсинского университета в Милуоки. Он является лауреатом премии выпускников UWM за выдающиеся успехи в преподавании и премии AIA-UWM Student Chapter Educator Award в 2001 году. Профессор Хэнлон является зарегистрированным архитектором, работающим над жилыми, коммерческими и институциональными проектами.

Сравнение химического состава и остеопротекторного действия различных срезов пантов бархатного

Этнофармакологическая актуальность: На протяжении веков утверждалось, что бархатные рога обладают многочисленными медицинскими преимуществами, включая укрепление костей.Изучить и сравнить антиостеопорозную активность разных разделов VA.

Материалы и методы: Свежий VA, приготовленный из выращиваемых на фермах пятнистых оленей (Cervus nippon), был разделен на верхний (VAU), средний (VAM) и базальный (VAB) участки. Химические составляющие и антиостеопоротический эффект различных срезов из VA оценивали с использованием овариэктомированных крыс.

Результаты: Уровни водорастворимых экстрактов, разбавленного спиртового экстракта, аминокислот, тестостерона, инсулиноподобного фактора роста (IGF) -1 и тестостерона плюс эстрадиола значительно различались в разных разделах.Уровни этих составляющих были значительно выше в верхнем разрезе, чем в базальном. Более того, уровни тестостерона и IGF-1 в ВАМ также были значительно выше, чем у ВАМ. Уровень кальция повышался вниз от кончика со статистической значимостью. Сила позвонков увеличилась во всех группах, получавших VA, по сравнению с контролем, но только лечение VAU и VAM увеличивало прочность бедренной кости и микроархитектуру губчатой ​​кости. Уровни щелочной фосфатазы в группах, получавших VAU и VAM, значительно снизились, но остеокальцин существенно не изменился.Более того, VAU и VAM дозозависимо увеличивали пролиферацию и минерализацию клеток MC3T3-E1.

Вывод: Наше исследование предоставляет убедительные доказательства региональных различий в эффективности использования пантов из пантов при лечении остеопороза. Однако необходимы дальнейшие исследования для выяснения биоактивных химических компонентов, связанных с антиостеопоротическим действием бархатного рога.

Ключевые слова: Бромид 3- (4,5-диметилтиазол-2-ил) -2,5-дифенилтетразолия; ALP; Щелочная фосфатаза; БВ / ТВ; DPD; ELISA; ES; FBS; GC; ВЭЖХ; IGF; Клетки MC3T3-E1; РС; МТТ; Микрокомпьютерный томографический анализ; OVX; Остеокальцин; Овариэктомия; RLX; СМИ; Tb.N; Tb.Sp; Tb.Th; VA; VAB; VAM; VAU; Бархатный рог; щелочная фосфатаза; объем кости по общему объему; дезоксипиридинолин; иммуноферментный анализ; этинилэстрадиол; фетальная бычья сыворотка; газовая хроматография; высокоэффективная жидкостная хроматография; инсулиноподобный фактор роста; масс-спектроскопия; овариэктомия; ралоксифен; индекс модели структуры; трабекулярный номер; трабекулярное разделение; толщина трабекул; бархатные рога; бархатный базальный разрез пантов; бархатные рога средней части; верхняя часть рогов из бархата; α-МЕМ; α-модифицированная минимально необходимая среда.

Основы композиции After Effects

Композиция — это рамка для фильма. У каждой композиции своя временная шкала. Типичная композиция включает несколько слоев, которые представляют такие компоненты, как элементы видео- и аудиозаписи, анимированный текст и векторная графика, неподвижные изображения и источники света. Вы добавляете элемент видеоряда в композицию, создавая слой, для которого этот элемент видеоряда является источником. Затем вы располагаете слои внутри композиции в пространстве и времени, а композит , используя функции прозрачности, чтобы определить, какие части нижележащих слоев видны через слои, уложенные поверх них.(См. Слои и свойства и Прозрачность и композитинг.)

Композиция в After Effects похожа на фрагмент ролика в Flash Professional или эпизод в Premiere Pro.

Вы визуализируете композицию для создания кадров окончательного выходного фильма, который кодируется и экспортируется в любое количество форматов. (См. Основы рендеринга и экспорта.)

Простые проекты могут включать только одну композицию; сложные проекты могут включать сотни композиций для организации большого количества отснятого материала или множества эффектов.

В некоторых местах пользовательского интерфейса After Effects композиция сокращенно обозначается как comp .

Каждая композиция имеет запись на панели «Проект». Дважды щелкните запись композиции на панели «Проект», чтобы открыть композицию на ее собственной панели «Таймлайн». Чтобы выбрать композицию на панели «Проект», щелкните правой кнопкой мыши (Windows) или щелкните, удерживая нажатой клавишу «Control» (Mac OS), на панели «Композиция» или на панели «Таймлайн» для композиции и выберите «Показать композицию в проекте» в контекстном меню.

Используйте панель «Композиция» для предварительного просмотра композиции и изменения ее содержимого вручную. Панель «Композиция» содержит рамку композиции , и область монтажного стола за пределами рамки, которую можно использовать для перемещения слоев в рамку композиции и из нее. Границы слоев за сценой — части, не попавшие в рамку композиции — показаны прямоугольными контурами. Для предварительного просмотра и окончательного вывода визуализируется только область внутри кадра композиции.

Рамка композиции на панели «Композиция» в After Effects аналогична рабочей области в Flash Professional.

При работе со сложным проектом проще всего организовать проект, вложив композиций — поместив одну или несколько композиций в другую композицию. Вы можете создать композицию из любого количества слоев, предварительно составив слоев. После изменения некоторых слоев вашей композиции вы можете предварительно скомпоновать эти слои, а затем выполнить предварительный рендеринг предварительной композиции, заменив его визуализированным фильмом. (См. Раздел «Предварительная компоновка, вложение и предварительный рендеринг».)

Вы можете перемещаться по иерархии вложенных композиций с помощью Навигатора композиции и Мини-блок-схемы композиции. (См. Открытие вложенных композиций и навигация по ним.)

Используйте панель «Блок-схема», чтобы увидеть структуру сложной композиции или сети композиций.

Получение составов на основе ПВС с внедренными наночастицами оксида серебра, меди и цинка и оценка их антибактериальных свойств

DOI: 10.1186 / s12951-020-00702-6.

Принадлежности Расширять

Принадлежности

• ¹ Факультет химической инженерии и технологии, Институт химии и неорганической технологии, Краковский технологический университет, Варшавская 24, 31-155, Краков, Польша[email protected].
• ² Факультет химической инженерии и технологии, Институт химии и неорганической технологии, Краковский технологический университет, Варшавская 24, 31-155, Краков, Польша.
• ³ Кафедра гигиены животных и экологических опасностей, Университет естественных наук, Академицка 13, 20-950, Люблин, Польша.

Бесплатная статья PMC

Элемент в буфере обмена

Jolanta Pulit-Prociak et al.J Нанобиотехнологии. 2020 .

Бесплатная статья PMC Показать детали Показать варианты

Показать варианты

Формат АннотацияPubMedPMID

DOI: 10.1186 / s12951-020-00702-6.

Принадлежности

• ¹ Факультет химической инженерии и технологии, Институт химии и неорганической технологии, Краковский технологический университет, Варшавская 24, 31-155, Краков, Польша. [email protected].
• ² Факультет химической инженерии и технологии, Институт химии и неорганической технологии, Краковский технологический университет, Варшавская 24, 31-155, Краков, Польша.
• ³ Кафедра гигиены животных и экологических опасностей, Университет естественных наук, Академицка 13, 20-950, Люблин, Польша.

Элемент в буфере обмена

Полнотекстовые ссылки Опции CiteDisplay

Показать варианты

Формат АннотацияPubMedPMID

Абстрактный

Приготовлена ​​серия жидких композиций на основе поливинилового спирта (ПВС) с добавлением оксида цинка, наночастиц серебра и меди.Композиции также содержали другие органические компоненты, образующие консистенцию. Определены физико-химические свойства продуктов. Были оценены их pH и плотность. Кроме того, размер наночастиц был определен с использованием метода динамического светорассеяния. Композиции также были подвергнуты XRD, FT-IR и микроскопическому анализу. Благодаря включению как оксида металла, так и металлических наночастиц, удалось обогатить продукты антибактериальными свойствами.Их ингибирующие свойства в отношении роста микроорганизмов были подтверждены в отношении как грамотрицательных, так и грамположительных штаммов, таких как E. coli, S. aureus и P. aeruginosa. Благодаря способности к затвердеванию композиции можно наносить на поверхность, загрязненную бактериями, и после уничтожения микроорганизмов и ее затвердевания они могут отслаиваться вместе с мертвой бактериальной пленкой.

Ключевые слова: Антибактериальный эффект; Покрытие; Нанокедь; Наносеребро; Наночастицы оксида цинка.

Заявление о конфликте интересов

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов.

Цифры

Фиг.1

a УФ – видимые спектры жидкости…

Фиг.1

a УФ – видимые спектры жидких составов; b XRD дифрактограмма всех составов в…

рисунок 1

a УФ – видимые спектры жидких составов; b XRD-дифрактограмма всех составов в твердой фазе и c FTIR-спектры всех составов в твердой фазе

Фиг.2

АСМ микрофотографии композиций а…

Фиг.2

АСМ микрофотографии составов а К1; b K5 и c K9

Рис. 2

АСМ микрофотографии составов а К1; b K5 и c K9

Фиг.3

Результаты физико-химического анализа…

Фиг.3

Результаты анализа физико-химических свойств чистых наночастиц a XRD nanoZnO;…

Рис. 3

Результаты анализа физико-химических свойств чистых наночастиц a XRD nanoZnO; b FTIR nanoZnO; c СЭМ микрофотографии nanoZnO; d УФ – видимые спектры nanoAg; e Гистограмма DLS для nanoAg и f Гистограмма DLS для nanoCu

Фиг.4

a — c Результаты…

Фиг.4

a — c Результаты анализа MIC против штаммов бактерий a Композиции с…

Рис. 4

a — c Результаты анализа MIC против штаммов бактерий a композиции с nanoZnO; b композиций с nanoAg и c композиций с nanoCu)

Фиг.5

Логарифмические сокращения тестируемых штаммов…

Фиг.5

Логарифмическое уменьшение исследуемых штаммов через 5 и 60 мин (n = 4)

Рис. 5

Логарифмическое уменьшение исследуемых штаммов через 5 и 60 мин (n = 4)

Похожие статьи

• Нанокомпозитная пленка серебро / поливиниловый спирт, полученная с использованием микроэмульсии вода в масле для антибактериальных применений.

  Fatema UK, Rahman MM, Islam MR, Mollah MYA, Susan MABH. Fatema UK и др. J Colloid Interface Sci. 2018 15 марта; 514: 648-655. DOI: 10.1016 / j.jcis.2017.12.084. Epub 2017 30 декабря. J Colloid Interface Sci. 2018. PMID: 29310094

• Синтез, физико-механические и антибактериальные свойства нанокомпозитов на основе наночастиц поливиниловый спирт / оксид графена-серебро.

  Кобос М., Де-Ла-Пинта И., Киндос Г., Фернандес М.Дж., Фернандес, доктор медицины. Кобос М. и др. Полимеры (Базель). 2020 24 марта; 12 (3): 723. DOI: 10.3390 / polym12030723. Полимеры (Базель). 2020. PMID: 32214025 Бесплатная статья PMC.

• Антибактериальная эффективность композитных нановолокон на основе поливинилового спирта, встроенных в закрепленные серебром наночастицы диоксида кремния.

  Jatoi AW, Jo YK, Lee H, Oh SG, Hwang DS, Khatri Z, Cha HJ, Kim IS.Jatoi AW, et al. J Biomed Mater Res B Appl Biomater. 2018 Апрель; 106 (3): 1121-1128. DOI: 10.1002 / jbm.b.33925. Epub 2017 15 мая. J Biomed Mater Res B Appl Biomater. 2018. PMID: 28503896

• Наночастицы в питании лошадей: механизм действия и применение в качестве кормовых добавок.

  Адегбай MJ, Эльгандур MMMY, Барбабоса-Плиего A, Монрой JC, Mellado M, Ravi Kanth Reddy P, Salem AZM.Adegbeye MJ, et al. J Equine Vet Sci. 2019 июл; 78: 29-37. DOI: 10.1016 / j.jevs.2019.04.001. Epub 2019 5 апр. J Equine Vet Sci. 2019. PMID: 31203981 Обзор.

• Нанотехнологии как терапевтический инструмент борьбы с микробной резистентностью.

  Pelgrift RY, Friedman AJ. Pelgrift RY, et al. Adv Drug Deliv Rev.2013 ноя; 65 (13-14): 1803-15. DOI: 10.1016 / j.addr.2013.07.011. Epub 2013 24 июля. Adv Drug Deliv Rev.2013. PMID: 23892192 Обзор.

Процитировано

1 артикул

• Повышение противогрибковой активности гризеофульвина путем включения зеленого нанокомпозита на основе биополимера.

  Шехабелдин А., Эль-Хамшари Х., Хасанин М., Эль-Фахам А., Аль-Сахли М.Shehabeldine A, et al. Полимеры (Базель). 2021, 12 февраля; 13 (4): 542. DOI: 10.3390 / polym13040542. Полимеры (Базель). 2021 г. PMID: 33673135 Бесплатная статья PMC.

использованная литература

1. 1. Теулон Дж. М., Годон С., Шанталат Л., Морискот С., Камбедузу Дж., Одорико М. и др. Об операционных аспектах измерения размеров наночастиц.Наноматериалы. 2019; 9:18. DOI: 10.3390 / nano

      18. — DOI — ЧВК — PubMed

2. 1. Salamanca-Buentello F, Persad DL, Court EB, Martin DK, Daar AS, Singer PA.Нанотехнологии и развивающийся мир. PLoS Med. 2005; 2: e97. DOI: 10.1371 / journal.pmed.0020097. — DOI — ЧВК — PubMed
3. 1. Прабху С., Пулозе Е.К.Наночастицы серебра: механизм противомикробного действия, синтез, медицинские применения и токсичность. Int Nano Lett. 2012; 2: 1. DOI: 10.1186 / 2228-5326-2-32. — DOI
4. 1. Дакал Т.С., Кумар А., Маджумдар Р.С., Ядав В. Механические основы антимикробного действия наночастиц серебра.Front Microbiol. 2016; 7: 1831. DOI: 10.3389 / fmicb.2016.01831. — DOI — ЧВК — PubMed
5. 1. Сорракин-Пенья I, Куэва С., Бартоломе Б., Морено-Аррибас М.В.Наночастицы серебра против бактерий пищевого происхождения. Воздействие на кишечник и ограничение здоровья. Микроорганизмы. 2020; 8: 132. DOI: 10.3390 / microorganisms8010132. — DOI — ЧВК — PubMed

Показать все 73 ссылки

LinkOut — дополнительные ресурсы

• Источники полного текста

• Разное

Raft доменов с различными свойствами и составами в везикулах плазматической мембраны

Abstract

Биологические мембраны разделены для функционального разнообразия за счет множества специфических белок-белковых, белок-липидных и липид-липидных взаимодействий.Подмножеством из них являются предпочтительные взаимодействия между стеролами, сфинголипидами и насыщенными алифатическими липидными хвостами, ответственными за сосуществование жидких и жидких доменов в эукариотических мембранах, которые дают начало динамическим, наноскопическим ансамблям, слияние которых регулируется специфическими биохимическими сигналами. Микроскопическое разделение фаз, недавно наблюдаемое в изолированных плазматических мембранах (гигантские везикулы плазматической мембраны и сферы плазматической мембраны) ( i ), подтверждает способность композиционно сложных мембран разделять фазы ( ii ), отражает наноскопическую организацию мембран живых клеток, и ( iii ) предоставляет универсальную платформу для исследования составов и свойств фаз.Здесь мы показываем, что свойства сосуществующих фаз в гигантских пузырьках плазматической мембраны зависят от условий изоляции, а именно от химических веществ, используемых для индукции образования пузырей на мембране. Мы наблюдаем сильную корреляцию между относительным составом и порядком сосуществующих фаз и их результирующую смешиваемость. Химически невозмущенные плазматические мембраны отражают эти свойства и подтверждают наблюдения в химически индуцированных везикулах. Что наиболее важно, мы наблюдаем домены с континуумом различной стабильности, порядков и составов, вызванные относительно небольшими различиями в условиях изоляции.Эти результаты показывают, что на основе принципа преимущественной ассоциации липидов рафтов домены с различными свойствами могут быть получены в мембранной среде, сложность которой отражает биологические мембраны.

Недавнее открытие разделения фаз в пузырьках плазматической мембраны (ПМ), выделенных из клеток млекопитающих (1–3), является наиболее убедительным доказательством функционально значимого сосуществования жидких доменов в биологических мембранах. Микроскопические фазы, наблюдаемые в этих исследованиях, вероятно, являются результатом слияния наноскопических ансамблей (липидных рафтов), присутствующих в клеточных мембранах в физиологических условиях (4).Это объединение в конденсированную «фазу рафта» (5) позволяет исследовать под микроскопом состав (1, 6, 7) и физические свойства (8, 9) нижележащих сборок рафта.

Современная концепция липидных рафтов в клеточной биологии — это мезоскопические изолированные домены с определенными свойствами и составами. Как липидные рафты в клетках соответствуют простым модельным системам липидов — которые демонстрируют полное микроскопическое разделение конденсированной упорядоченной фазы ( L _o ), богатой насыщенными липидами и стеринами, от неупорядоченной ( L _d ) фаза, обедненная этими компонентами и обогащенная ненасыщенными глицерофосфолипидами (10, 11), — еще предстоит определить.Крупномасштабные мембранные домены не наблюдаются в интактных клетках без значительного нарушения (например, путем перекрестного связывания антител; ссылка 12), поэтому субмикроскопическая архитектура мембраны была выведена из биохимического фракционирования целых клеток или спектроскопических методов, которые исследуют уровень отдельные молекулы. В отличие от биофизических результатов простых модельных систем, такие эксперименты показали возможность существования множества мембранных доменов, биологическая значимость и физико-химические детерминанты которых остаются неопределенными.

Разделение фаз в синтетических модельных системах повторяется в изолированных PM, которые содержат полный набор липидов и белков нативных мембран. Гигантские везикулы плазматической мембраны (GPMV) (1) и сферы плазматической мембраны (PMS) (2) представляют собой разные препараты PM, которые позволяют напрямую исследовать свойства мембран, не связанные с клеточной сложностью (например, взаимодействия с элементами цитоскелета, мембранный перенос и т. Д.). В обоих препаратах сферические выступы PM микрометрового размера отделяются от нижележащего каркаса цитоскелета [который может ингибировать (13), сегрегировать (14) и / или зарождать (15) домены PM], что позволяет разделить фазы на жидкость, наблюдаемую под микроскопом. домены.Эти сосуществующие фазы сортируют компоненты PM на основе их сродства к липидным рафтам (2, 7, 16), что делает их идеальными моделями для исследования рафтовых доменов в живых клетках.

В предыдущей статье (7) мы показали, как условия изоляции влияют на пальмитоилирование белков и, следовательно, на разделение рафтовой фазы трансмембранных (TM) белков в PM, выделенных с помощью химических обработок (GPMV). Здесь мы видим, что свойства самих фаз также зависят от средств изоляции, в частности, от химических веществ, используемых для образования пузырей.Разделение фаз, наблюдаемое без химического возмущения, отражало поведение подмножества химически индуцированных пузырьков, тем самым подтверждая присущий PMs потенциал разделения фаз. Наконец, различные условия выделения оказали большое влияние на температуру разделения фаз, распределение белка между фазами и разницу относительного порядка между сосуществующими фазами, предполагая, что рафтовые домены с постоянно меняющимися свойствами и составами достижимы в мембранах с биологической сложностью.

Результаты

GPMV, выделенных из линии клеток базофильной лейкемии крыс (RBL) с использованием типичной химической смеси 25 мМ параформальдегида (PFA) и 2 мМ DTT (PFA + DTT), разделенных на две жидкие фазы, которые можно было наблюдать путем предварительного окрашивания клеток мембранный маркер с неравномерным фазовым разделением (FAST-DiO; рис. 1 A ). В этом препарате сосуществующие фазы обычно объединяются в два больших домена, которые остаются разделенными при температуре, близкой к комнатной ( T _misc = 17.8 ± 1,3 ° C), как наблюдалось ранее (1, 7–9) (рис. 1 A — C ). Напротив, GPMV, выделенные с использованием 2 мМ N -этилмалеимида (NEM) (7), не образующего поперечные сшивки, невосстанавливающего сульфгидрил-реактивного химического вещества, имели домены меньшего размера, более диспергированные (рис. 1 A ), и которые наблюдались только при относительно низких температурах (ниже 10 ° C) (рис. 1 A — C ).

Рис. 1.

GPMV, полученных с помощью комбинации PFA и DTT, остаются разделенными на фазы при более высоких температурах, чем другие наборы условий изоляции.( A и B ) Типичные изображения и количественная оценка GPMV, полученных либо с 2 мМ NEM, либо с комбинацией 25 мМ PFA и 2 мМ DTT (кривые соответствуют сигмоидальным данным). Микроскопически большие круглые сросшиеся домены сохраняются в GPMV PFA + DTT примерно до 20 ° C. Напротив, домены в везикулах, полученных из NEM, меньше, более диспергированы и не наблюдаются при температуре выше 10 ° C. ( ° C ) Температура перехода к смешиваемости ( T _misc , определяемая как температура, при которой 50% везикул разделяются на фазы) в GPMV как функция изолирующего агента (ов).Выделение GPMV только с 2 мМ NEM, комбинацией 2 мМ NEM и 25 мМ PFA или с PFA + NEM с добавлением несульфгидрильного восстанавливающего агента (TCEP) или ингибитора пальмитоилирования (2BP) не воспроизводит фенотип PFA + DTT .

Для проверки гипотезы о том, что разительная разница в фазовом поведении между GPMV, полученными с использованием PFA + DTT, по сравнению с NEM, была обусловлена ​​эффективным и неспецифическим сшиванием аминосодержащих соединений формальдегидом, GPMV были получены с 2 мМ NEM с добавлением 25 мМ PFA.Наблюдалось разделение фаз, но оно сохранялось только приблизительно до 5 ° C (т.е. аналогично пузырькам, полученным только с помощью NEM) (фиг. 1 C ). Чтобы проверить, является ли восстанавливающее поведение DTT ответственным за повышенную стабильность домена в PFA + DTT GPMV, препарат NEM был дополнен 2 мМ трис (2-карбоксиэтил) фосфином (TCEP), мощным несульфгидрильным восстанавливающим агентом (мы использовали TCEP вместо DTT, поскольку NEM содержит сульфгидрил-реактивную малеимидную группу, таким образом, смесь NEM и DTT будет инактивировать одно или оба соединения, что соответствует отсутствию блеббинга в этом препарате.Снова в этом случае наблюдались везикулы с разделенными фазами, температура перехода в смешиваемость которых ( T _misc ) была статистически неотличима от NEM GPMV (Рис. 1 C ). Наконец, ингибирование пальмитоилирования (2-бромпальмитатом, 2BP) до выделения везикул не влияло на T _misc (рис. наблюдаемые эффекты. Таким образом, ни неспецифическое поперечное сшивание, ни восстановление дисульфидов, ни депальмитоилирование не являются единственными ответственными за разделение фаз, наблюдаемое в GPMV PFA + DTT.

Для контроля возможной перекрестной реакции изолирующих агентов, а также непредсказуемых клеточных эффектов этих химикатов, GPMV выделяли с помощью NEM, PFA + DTT или PFA + NEM, диализовали для удаления изолирующих агентов, а затем обрабатывали после выделения. . Наблюдая за изолированными, диализованными и подвергнутыми последующей обработке везикулами при 10 ° C, можно было легко воспроизвести отчетливое фазовое поведение, наблюдаемое выше. Обработка NEM везикул PFA + DTT не имела наблюдаемого эффекта (рис.2 A ), тогда как обработка PFA + DTT NEM GPMV воспроизводила поведение PFA + DTT (рис.2 В ). Таким образом, поскольку поведение PFA + DTT может быть воспроизведено последующей обработкой изолированных везикул, наблюдаемые «фенотипы» фазового разделения не являются функцией клеточных процессов (например, активности фосфолипазы, деградации белка и т. Д.), На которые может повлиять выделение GPMV. условия.

Рис. 2.

Обработка после изоляции воспроизводит фенотип PFA / DTT только тогда, когда присутствуют и PFA, и DTT. ( A — F ) Репрезентативные изображения (все сняты при 10 ° C) GPMV, выделенных в условиях, показанных слева от изображений, затем подвергнутых диализу для удаления изолирующих химикатов, затем обработанных химическими веществами, указанными над стрелками.Разделение фаз при этой температуре наблюдается только в том случае, если присутствуют PFA и DTT, либо в качестве условия изоляции, либо после обработки после изоляции. ( G ) Процент GPMV с разделением фаз в зависимости от температуры для различных условий изоляции и обработки. Каждая точка представляет 50–100 пузырьков; кривые — сигмоидальные аппроксимации данных. Репрезентативные результаты трех независимых экспериментов.

Примечательно, что ни постобработка только DTT (рис. 2 C ), ни только PFA (рис.2 D ) оказал какое-либо наблюдаемое влияние на разделение фаз; однако обработка везикул NEM + PFA с помощью DTT воспроизводила фенотип PFA + DTT (рис. 2 E ). Как и в везикулах, выделенных с помощью TCEP, восстановление диализованных везикул PFA + NEM с помощью TCEP не воспроизводило поведение PFA + DTT (рис. 2 F ). Количественная оценка этих эффектов позволяет предположить, что наблюдаемое поведение можно четко разделить на два фенотипа — то есть те препараты, которые содержат как PFA, так и DTT (характеризующиеся объединенными доменами, сохраняющимися при температуре выше 15 ° C), и те, которые не содержат (разделение фаз наблюдается только при температуре ниже 10 ° C). ° С).Эти результаты показывают удивительную синергию между PFA и DTT в получении стабильных доменов, наблюдаемых в GPMV PFA + DTT.

Чтобы определить, какой из наблюдаемых фенотипов соответствует фазовому разделению в химически невозмущенных PM, мы использовали методы визуализации GPMV (т.е. окрашивание мембранным красителем с последующим охлаждением ниже 10 ° C) для наблюдения изолированного PMS, индуцированного набуханием клеток A431 ( 2). Нам удалось непосредственно наблюдать разделение жидкой фазы на жидкую фазу PM без химического возмущения или сшивки с экзогенными агентами (рис.3 А ). Домены обычно были небольшими и рассредоточенными и наблюдались только при температуре ниже 5 ° C, что позволяет предположить, что фенотип разделения фаз, наблюдаемый в NEM GPMV, отражает химически невозмущенные PM. Подобно GPMV, фенотип PFA + DTT может быть воспроизведен в этих химически неповрежденных мембранах, но только обработкой как PFA, так и DTT (Fig. 3 B ).

Рис. 3.

Разделение фаз в PMS. ( A ) PMS, выделенный путем набухания клеток без дополнительных химикатов, демонстрирует четкое разделение жидкой и жидкой фаз при температуре ниже 5 ° C (окрашивание 1 мкг / мл FAST-DiO, маркер неупорядоченной фазы).( B ) Обработка PMS с помощью PFA + DTT воспроизводит фенотип PFA + DTT в GPMV, тогда как обработка PFA или DTT по отдельности не оказывает значительного влияния на фазовое поведение.

Переход от NEM к фенотипу PFA + DTT зависел от концентрации DTT (рис. 4). Увеличение [DTT] от 0,5 до 5 мМ при постоянном [PFA] (25 мМ) давало GPMV, которые разделялись на фазы при прогрессивно более высоких температурах, от ниже 10 до выше 15 ° C (фиг. 4 A ). Объединение данных из многих экспериментов показало резкий переход фазового поведения между 0.2 и 1 мМ DTT (рис.4 B ). Напротив, варьирование [PFA] в диапазоне концентраций, в результате которого получали измеряемые везикулы (5–250 мМ), не влияло на температуру перехода к смешиванию (рис. 4 C ).

Рис. 4.

[DTT] -зависимое разделение фаз. ( A ) Разделение фаз можно было вызвать при прогрессивно более высоких температурах путем увеличения [DTT] в буфере для выделения GPMV при постоянном [PFA] (25 мМ). Каждая точка представляет 75–100 пузырьков на одно состояние; кривые — сигмоидальные аппроксимации данных.Репрезентативные результаты трех независимых экспериментов. ( B ) T _misc увеличивается от ниже 5 ° C до выше 15 ° C между [DTT] = 0,2 и 2 мМ. Данные при 0 мМ DTT включают везикулы, полученные только с NEM, NEM + PFA и только с PFA. ( C ) Никаких изменений в T _misc не наблюдалось при изменении [PFA] при постоянном [DTT] (2 мМ) в диапазоне, который дает GPMV. Баллы в B и C являются средними ± стандартное отклонение от трех до семи независимых испытаний.

Этот поразительный эффект DTT можно также наблюдать в разнице в порядке сосуществующих фаз в различных препаратах (рис. 5). GPMV, полученные с различным [DTT], были помечены C-лаурданом и отображены в условиях разделения фаз (5 ° C для всех препаратов). C-Laurdan представляет собой флуоресцентный мембранный краситель, эмиссия которого зависит от относительной упаковки мембраны (17), которая ранее использовалась для характеристики изолированных PM (18). Количественная оценка флуоресценции с красным смещением, характерной для неупорядоченных мембран, по сравнению с флуоресценцией от упорядоченных мембран дает обобщенную поляризацию (GP), относительный показатель, где более высокий GP указывает на более упорядоченное мембранное окружение (рис.5 А ). Домены с различным порядком можно было наблюдать во всех условиях изоляции (рис. 5 A ), хотя ни абсолютный порядок доменов, ни разность порядков между сосуществующими фазами не оставались постоянными (рис. 5 B ). Включение PFA в буфер для выделения не увеличивало порядок мембран, как можно было ожидать от поперечного сшивания компонентов мембраны. Напротив, увеличение [DTT] резко увеличивало разность порядков между фазами от 0.13 ± 0,04 без DTT до 0,21 ± 0,04 при 2 мМ (рис. 5 B и C ). Изменение ΔGP (GP _{, упорядоченный} — GP _{неупорядоченный} ) наблюдался между 0,2 и 2 мМ DTT, что отражает изменение T _misc , показанное на рис. 4. Таким образом, увеличивается разница в порядке между двумя сосуществующими фазами. сильно коррелирует с повышенной температурой перехода к смешиваемости.

Рис. 5.

Разница в порядке сосуществующих фаз зависит от [DTT].( A ) Примерные изображения GP сосуществующих доменов в GPMV (все изображения получены при 5 ° C). GP является относительным показателем порядка мембраны (более высокий GP соответствует более упорядоченным мембранам). ( B и C ) Хотя включение PFA не оказало большого влияния на порядок (сравнение NEM с 25 мМ PFA + 0,2 мМ DTT), увеличение [DTT] уменьшило общий порядок и увеличило относительную разницу в порядке между сосуществующие фазы. Среднее значение ± стандартное отклонение для 10 везикул на одно условие и репрезентативное для трех экспериментов.

Корреляция между разницей порядка и [DTT] может быть напрямую связана с прогрессирующей потерей белка из фазы рафта (рис. 6). Относительную концентрацию белка в сосуществующих фазах визуализировали путем неспецифического мечения внеклеточно доступных белков сульфо- N -гидроксисульфосукцинимид (NHS) -биотином и получения GPMV, которые затем метили флуоресцентно модифицированным антибиотином Fab ‘(как в ссылке 7). . Таким образом, количественная оценка относительной интенсивности флуоресценции между сосуществующими фазами является репортером относительной концентрации белка в двух фазах (рис.6 А ). Используя этот метод, было четко отмечено, что увеличение [DTT] в среде выделения GPMV было ответственно за потерю белка из фазы рафта, при этом относительная концентрация белка рафта / нерабочего белка снижалась с 0,52 в NEM GPMV (без DTT) до 0,07 в везикулах, изолированных с 2 мМ DTT (рис. 6 B ).

Рис. 6.

Относительная концентрация белка в сосуществующих фазах зависит от [DTT]. ( A ) Относительная концентрация белка в сосуществующих фазах GPMV может быть определена количественно с помощью флуоресцентной визуализации Fab ’антибиотина после неспецифического мечения белка сульфо-NHS-биотином.( B ) K _{p , raft} (соотношение интенсивности в фазе raft по сравнению с непрафтой) внеклеточно доступных белков уменьшается с [DTT] от высокой концентрации белков raft в NEM GPMV до едва заметного белка raft сигнал в 2 мМ DTT. Баллы представляют собой среднее значение ± стандартное отклонение> 15 пузырьков на состояние, что соответствует трем независимым экспериментам.

Удаление белка из упорядоченной фазы может быть связано с химическим связыванием мембранных белков с первичным аминсодержащим липидом, фосфатидилэтаноламином (PE), посредством альдегид-опосредованного поперечного сшивания (рис.7). Тонкослойная хроматография (ТСХ) липидов, экстрагированных из GPMV, показала количественное истощение PE из экстракта органических липидов [относительно фосфатидилхолина (PC), который не был затронут], когда GPMV были выделены с PFA и DTT, скорее всего, из-за ковалентного присоединения этого липида к соседним белковым фрагментам. Зависимость [DTT] этого эффекта сильно коррелировала с зависимостью [DTT], наблюдаемой для температуры перехода смешиваемости (рис. 4), порядка (рис. 5) и разделения белков (рис.6). Чтобы проверить перекрестное связывание PE с пептидами с помощью PFA + DTT в контролируемой системе, PE-содержащие липосомы (80/20 PC / PE) обрабатывали PFA + DTT в присутствии или в отсутствие пептидов (фиг. 7 C ) . Обработка чистых липидных липосом PFA + DTT не влияла на экстрагированные липиды, тогда как включение пептида TM (3 мол.%) Приводило почти к полному истощению PE из органического экстракта. Тот же эффект, хотя и в гораздо меньшей степени, наблюдался с растворимым белком (γ-глобулином).Таким образом, наши результаты показывают, что порядок фаз рафта и коалесценция сильно зависят от распределения мембранных белков, которое, в свою очередь, может модулироваться степенью связывания между мембранными белками и ненасыщенными фосфолипидами.

Рис. 7. Изоляция

GPMV с PFA и DTT приводит к снижению извлеченного PE. ( A ) ТСХ липидов, экстрагированных из GPMV, в зависимости от условий выделения. Интенсивность полосы ПЭ уменьшается по сравнению с ПК с увеличением [DTT]. ( B ) Среднее ± стандартное отклонение пиковых интенсивностей ПЭ за вычетом фона относительно ПК.Репрезентативные результаты трех независимых экспериментов. ( C ) ТСХ липидов, экстрагированных из липосом 80/20 PC / PE. Обработка PFA + DTT не снижает экстрагируемого PE, если в препарат не включен пептид TM (3 мол.% LW пептида) или растворимый белок (3 мол.% Γ-глобулина).

Обсуждение

Липид-опосредованное разделение фаз в ТЧ может наблюдаться в различных препаратах, независимо от природы (рис. 1 и 2) или присутствия (рис. 3) химических веществ, используемых для выделения.Наблюдаемые под микроскопом фазы в этих изолированных мембранах отражают липид-липидные и липид-белковые взаимодействия, которые приводят к появлению наноскопических доменов в живых клетках (5), слияние которых может быть вызвано биохимическими (2, 3) или физическими средствами (например, снижением температура). Наиболее поразительным результатом вышеупомянутых исследований является то, что, хотя разделение фаз не зависит от содержания белка в рафтовой фазе, свойства рафтовых доменов в GPMV варьируются в зависимости от континуума стабильности (рис.4), порядки (рис. 5) и составы (рис. 6), и что они модулируются небольшими изменениями в условиях приготовления. Эти свойства GPMV, полученных без неспецифического перекрестного связывания белка с липидами (то есть, NEM GPMV), отражают свойства немодифицированного PMS (рис. 3), предполагая, что они могут в наибольшей степени отражать нативный PM.

Мы наблюдаем сильную корреляцию между концентрацией белка в рафтовой фазе, разницей порядка сосуществования и температурой разделения фаз.Эти корреляции, вероятно, являются причинными: можно ожидать, что исключение интегральных белков увеличит липидную упаковку рафтовой фазы, таким образом, улучшая ее порядок по сравнению с непроточной фазой и способствуя разделению фаз. Эти данные концептуально обобщены на рис. 8. Очень низкая концентрация белка рафтовой фазы в препаратах с высоким содержанием DTT (рис. 6) предполагает, что он состоит в основном из липидов и липидно-заякоренных белков (GPI-заякоренные белки постоянно обогащены рафтовые фазы независимо от подготовки; исх.1, 6, 7), отделенный от богатой белком сильно неупорядоченной фазы (рис. 8, Top ). Напротив, препараты с низким (или отсутствующим) DTT продуцировали сосуществующие домены со сходными концентрациями белка — хотя и не составами (7) — и упорядочением (фиг. 8, Средний и Нижний ). Относительная разница между сосуществующими доменами, вероятно, повлияет на их разделение, о чем свидетельствуют данные T _misc на рис. 4.

рис. 8.

Домены непрерывно меняющегося порядка и состава, наблюдаемые в пузырьках PM, изолированных с помощью PFA и варьируя [DTT].

Возможная связь этих результатов с разделением фаз при физиологических температурах может быть сделана из недавних наблюдений за критическим поведением GPMV. Veatch et al. показали, что линейные натяжения и флуктуации состава в GPMV с разделением по фазе могут быть приспособлены к универсальным масштабным коэффициентам для систем вблизи критических точек (8). Экстраполируя это универсальное поведение, они предсказали колебания состава на десятки нанометров при 37 ° C. Если распространить эти результаты на наши эксперименты, изменение T _крит с 17 до 5 ° C (разница в T _misc между препаратами с высоким и низким DTT) будет соответствовать примерно двукратному изменению размера домена ( и соответствующее четырехкратное изменение времени жизни домена) при 37 ° C.Однако следует подчеркнуть два основных предостережения: ( i ) Критическое поведение до сих пор наблюдалось только в 2 мМ DTT GPMV и поэтому не должно автоматически выводиться для всех других условий изоляции; и ( ii ), даже если критическое поведение позволяет экстраполировать свойства домена на физиологическую температуру в GPMV, это по-прежнему изолированные мембраны, полученные с помощью химической обработки и отделенные от присущей живым клеткам сложности, что позволяет напрямую сравнивать их свойства и структуру. / Функция живых мембран по своей сути умозрительна.

Тем не менее, наши наблюдения, что биологические мембраны способны образовывать упорядоченные жидкие домены с различными свойствами, могут объяснить удивительные вариации в составе и размере рафта, измеренных в живых клетках: хотя Pralle et al. получили диаметр рафта примерно 50 нм, согласованный для двух разных типов клеток (19), другие оценки поместили значение от нескольких нанометров (20) до нескольких сотен (21). Наши наблюдения показывают, что различия в типе клеток, состоянии клеток или даже локальном внутриклеточном окружении могут объяснять рафтовые домены разного размера и состава, управляемые одним и тем же принципом организации.Например, хотя апикальная мембрана поляризованной эпителиальной клетки может быть концептуализирована как большой непрерывный рафт-домен (22) (предположительно из-за обогащения рафтовыми липидами апикальной PM; ссылка 23), PM многих неполяризованных клеток можно ожидать, что будут иметь место небольшие, короткоживущие домены, которые можно наблюдать только косвенными методами (20). Аналогичным образом, относительно неупорядоченные домены рафтов, наблюдаемые здесь (например, в NEM GPMV), могут быть физико-химическими аналогами различных «непромышленных» доменов PM, выведенных из биохимических и наноскопических наблюдений, включая домены GPI-заякоренных белков (AP) (24), тяжелых рафтов. (25), рафты Lubrol (26), домены Hras (27), островки рецепторов Т-клеток (28) и тетраспаниновые сети (29).Таким образом, принцип рафта, определяемый как предпочтительные взаимодействия между стеринами, насыщенными липидами, гликосфинголипидами и определенными белками, может использоваться клеткой для производства высокоупорядоченных, стабильных доменов, содержащих только липиды и заякоренные с липидами белки (например, предполагаемые домены GPI-AP из экспериментов FRET или доменов Ras, наблюдаемых с помощью ЕМ), а также более неупорядоченные домены, включающие ТМ-белок, которые не обязательно должны быть нерастворимыми в неионных детергентах.

Очевидно, наблюдаемые здесь возмущения являются артефактическими последствиями обработки мембран экзогенными химическими агентами.Ранее мы показали, что DTT может вызывать удаление белка из рафтовой фазы путем депальмитоилирования (7), и этот эффект может частично отвечать за наблюдаемые здесь возмущения. Однако диапазон концентраций, при котором здесь наблюдаются DTT-зависимые эффекты (0,2–1 мМ), значительно ниже, чем тот, который необходим для индукции депальмитоилирования (по крайней мере 2 мМ DTT) (7). Кроме того, предварительная обработка клеток ингибитором пальмитоилирования 2BP не влияла на разделение фаз (рис.1 C ), подтверждая ограниченную роль пальмитоилирования в наблюдаемых эффектах. Скорее, активность, которая, по-видимому, является самой большой движущей силой наблюдаемых эффектов, — это связывание PE с мембранными белками, опосредованное PFA и DTT (рис. 7). Ожидается, что эта активность истощит рафтовую фазу белков TM, потому что ацильные цепи PE почти всегда ненасыщены (30) и, следовательно, ковалентный комплекс белок-PE будет предпочтительнее. Проверяемая гипотеза, которая следует из этого предложения, состоит в том, что белковые составы и свойства рафтовых доменов могут регулироваться переключаемым сродством мембранных белков к определенным мембранным фосфолипидам.Хотя наблюдались несколько специфических взаимодействий между интегральными белками и мембранными липидами (например, для рецептора эпидермального фактора роста; ссылка 31 и другие, рассмотренные в ссылке 32), систематического анализа, чтобы определить, насколько широко распространено это явление, не проводилось, а также можно ли его обратимо регулировать. Эта область представляет собой забытую область мембранной биологии, которая созрела для дальнейших исследований.

Заключение

Наблюдение за фазами различных порядков и составов в везикулах PM предполагает, что биологические мембраны обладают потенциалом для образования доменов с постоянно изменяющимся составом и стабильностью.Функциональные последствия этих открытий еще предстоит изучить; однако понятие рафтовых доменов различных размеров, свойств и составов представляет собой эволюцию нашего понимания липидных рафтов от сбивающего с толку набора трудно поддающихся определению доменов к физико-химическому принципу организации мембран для функциональной компартментализации биологических мембран.

Материалы и методы

Культура клеток и маркировка.

Клетки RBL

культивировали в среде, содержащей 60% MEM, 30% RPMI, среду 1640, 10% FCS, 2 мМ глутамина, 100 единиц / мл пенициллина и 100 мкг / мл стрептомицина при 37 ° C в увлажненном 5% CO ₂ .Клетки A431 выращивали в аналогичных условиях в 90% MEM + 10% FCS. Перед выделением GPMV / PMS клеточные мембраны окрашивали 5 мкг / мл FAST-DiO (Invitrogen), липидного красителя, который сильно разделяется на неупорядоченные фазы за счет двойных связей в своих жировых якорях.

Изоляция, маркировка и лечение GPMV и PMS.

GPMV были изолированы (1) и отображены (9) в условиях контролируемой температуры, как описано ранее. Для постизолированной обработки химические вещества для изоляции удаляли диализом, а GPMV обрабатывали в течение 1 часа при 37 ° C.ПМС выделяли, как описано (2). Относительные величины порядка были измерены с помощью двухфотонной микроскопии C-Laurdan в разделенных фазах GPMV при 5 ° C, как описано ранее (18).

Маркировка белков клеточной поверхности.

Белки, экспонированные на поверхности, были биотинилированы с использованием мембранно-непроницаемого реагента биотина, реагирующего с амином, как описано (7). Вкратце, клетки инкубировали на льду в течение 30 минут в присутствии сульфо-NHS-биотина (1 мг / мл; Sigma) с последующим выделением GPMV и окрашиванием мономерным Fab ‘-фрагментом козьего антибиотина, связанного с техасским красным (10 мкг / мл; Rockland Immunochemicals).Изображения техасского красного сигнала количественно оценивали, как описано (7), чтобы получить K _{p , raft} , относительную концентрацию поверхностного белка в фазе raft.

Тонкослойная хроматография и модельные липосомы.

Липиды экстрагировали с использованием двухэтапного протокола экстракции (хлороформ-метанол 10-1, затем 2-1) (33). Липидсодержащие органические фазы с обеих стадий объединяли и сушили в потоке азота. Липиды повторно растворяли в небольшом объеме смеси хлороформ / метанол (3-1) и наносили на пластину для ТСХ.Для анализа методом ТСХ использовали смесь 97∶2 хлороформ-метанол-аммиак (25% раствор). Липиды были обнаружены после опрыскивания планшета 20% раствором H ₂ SO ₄ и нагревания (200 ° C, 3–5 мин). Для количественной оценки планшеты для ТСХ сканировали и с помощью ImageJ генерировали профили интенсивности каждой дорожки.

Модельные липосомы получали из 80 мол.% PC (1-α-фосфатидилхолин; Avanti) и 20 мол.% PE (1-α-фосфатидилэтаноламин; Avanti), как описано (31).LW пептид [ацетил-KKWWLLLLLLLLALLLLLLLLLLWWKK-амид; любезный подарок от Э. Лондона (Университет Стони Брук, Нью-Йорк)] и γ-глобулин (Рокленд) были включены в количестве 3 мол.%.

Благодарности

Авторы выражают признательность за финансирование со стороны стипендий для докторантов Фонда Гумбольдта; Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) «Schwerpunktprogramm 1175», грант SI459 / 2-1; ДФГ «Трансрегио 83» Грант TRR83 TP02; Европейский научный фонд «ЛИПИДПРОД», грант SI459 / 3-1; Bundesministerium fuer Bildung und Forschung «ForMaT», грант 03FO1212; и Фонд Клауса Чира.

Сноски

• Вклад авторов: I.L., M.G., and K.S. спланированное исследование; I.L. и М. проведенное исследование; I.L. проанализированные данные; и И. и К.С. написал газету.

• Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

• Эта статья представляет собой прямое представление PNAS.

Точные композиции Даниэля Руэды и Анны Девис превращают архитектуру в игривые портреты

Фотография

#архитектура #юмор # портреты

22 июля 2021 г.

Грейс Эберт

Все изображения © Даниэль Руэда и Анна Девис, предоставлены с разрешения

Дуэт из Валенсии, Анна Девис и Даниэль Руэда (ранее), добавляют игривую нотку в обыденную обстановку и архитектурные декорации.Будь то расклешенная юбка в широкую дрянную ухмылку, позирование, чтобы поддержать полосы фасада, или сжимание хвоста воздушного шара, который выглядит как привязанное солнце, их минималистичные композиции превращают геометрические элементы и открытые пространства в театральные декорации, спелые юмором и радостью. .

Devís сообщает Colossal, что каждое повествовательное изображение является результатом обширного планирования, которое начинается с первоначального наброска, включает в себя объединение концепции и места действия, а затем создание реквизита. Они не используют какое-либо программное обеспечение для редактирования фотографий, а это означает, что каждый снимок точно скомпонован на месте с естественным освещением, — объясняет она:

Мы тщательно подготовили сцену к реальной жизни, используя всевозможные предметы повседневного обихода, красочную бумагу, подходящую одежду и много естественного света.На первый взгляд, можно подумать, что большинство наших изображений не так уж сложно сделать из-за их скромного внешнего вида. Но с годами мы узнали, что достичь такого уровня простоты действительно очень сложно.

В ближайшие месяцы дуэт планирует поехать в разные места для фотосессий — «Есть много красивых мест, где мы хотели бы рассказать историю, но мы еще не догадались», — говорит Девис, — и находятся в процессе работы над предстоящей книгой и несколькими выставками.Вы можете найти обширный архив в Instagrams Девиса и Руэды и купить распечатки на их сайте.

#архитектура #юмор # портреты

Имеют ли для вас значение такие рассказы и художники? Станьте колоссальным участником и поддержите независимые публикации в области искусства. Присоединяйтесь к сообществу читателей-единомышленников, которые увлечены современным искусством, помогите поддержать нашу серию интервью, получите доступ к партнерским скидкам и многое другое.Присоединяйся сейчас!

---

---

---

---

---

.