Фото лонг: 38 модных вариантов с фото прически

Содержание

Стрижка лонг боб [удлиненный боб] 2022 – 15 вариантов модной прически на средние волосы с челкой и без

Прямые волосы до плеч, слегка укороченные сзади, — так выглядит классический лонг-боб. Но эта модная прическа имеет немало вариаций. Давайте разбираться, кому какой long bob идет и какие укладки этой стрижки актуальны в 2022 году

Содержание

Как выглядит стрижка лонг-боб?
Кому идет стрижка удлиненный боб?
Фото с идеями укладки и техника стрижки лонг-боб: тренды-2022
Техника выполнения стрижки удлиненный боб
Укладка лонг-боб
Советы стилистов

Как выглядит стрижка лонг-боб?

Лонг-боб, или, как его еще называют, удлиненный боб, — это стрижка средней длины, которую можно узнать по асимметричному срезу, открытой шее и удлиненным прядям у лица. Впрочем, это не строгое определение: одинаковая длина по всему периметру тоже встречается.

Стрижка лонг-боб — «сестра» классического боба, но в более длинной и, как правило, визуально более густой версии. Удлиненная версия оставляет больше простора для маневра: помимо вытянутой укладки, возможны и кудри, и пляжные локоны, и даже хвост или аккуратный пучок. Женская прическа лонг-боб пользуется популярностью и среди звездных дам: с этой стрижкой в разное время были замечены Кейт Миддлтон, Джей Ло, Роузи Хантингтон-Уайтли и другие селебрити.

На фото ниже стрижка лонг-боб дополнена окрашиванием в сложных техниках, и, согласитесь, результат выглядит превосходно!

Преимущества

Чем же так хорош удлиненный боб и в чем причины его популярности? Назовем главные достоинства.

Универсальность стрижки. Лонг-боб может интересно выглядеть независимо от формы лица и типа волос.
Неприхотливость в укладке. Одно из исключений — лонг-боб с челкой, хотя и тут можно найти вариант, который будет легко оформить безупречно.
Гибкий график посещения стилиста. Не успели на запланированный визит? Ничего страшного! Если кончики выглядят ухоженно, не возбраняется отложить обновление стрижки и походить с чуть более удлиненной версией.

Вернуться к оглавлению

Кому идет стрижка удлиненный боб?

Стрижка удлиненный боб заслужила такую любовь, потому что подходит самым разным девушкам. Если у вас тонкие волосы, которым не хватает объема, стоит поэкспериментировать. Возможно, укороченные пряди на макушке (с правильной градуировкой) — то, что вам нужно! Если волосы вьются, укладка может и не потребоваться. Про прямые волосы и говорить нечего — на них лонг-боб выглядит очень красиво, особенно если обеспечить локонам грамотный уход.

Лонг-боб — стрижка, которую носят с боковым или прямым пробором, косой или прямой челкой. Эти опции позволяют адаптировать ее к разным формам лица.

Например, ровный срез с пробором посередине советуют обладательницам овальной формы, а асимметричный вариант — тем, кто стремится визуально вытянуть овал лица. Им же рекомендуют дополнить стрижку прямой удлиненной челкой. Девушкам с вытянутым лицом, наоборот, показана укороченная челка.

Вернуться к оглавлению

Фото с идеями укладки и техника стрижки лонг-боб: тренды-2022

Удлиненный боб — универсальная стрижка, а значит, она идет практически всем. Мы собрали фотоидеи, которые с удовольствием примерили бы на себя. Теперь ваша очередь!

Лонг-боб с прямой челкой

Прямая челка как последний штрих красиво завершает стрижку, а в некоторых случаях и весь образ!

Брюнетки могут экспериментировать с глянцевым финишем на волосах. Для этого рекомендуем вымыть волосы с шампунем Elseve «Роскошь 6 Масел», а следом использовать бальзам из этой же гаммы. Затем высушите пряди, параллельно вытягивая их круглой щеткой, чтобы получить прямые волосы. Завершите укладку, распылив на волосы спрей c эффектом блеска, или, отступив пару сантиметров от корней, распределите по прядям капельку масла, предварительно разогрев его в руках.

Градуированный лонг-боб

Градуировка — прием, к которому прибегают, когда основной объем волос хочется сконцентрировать на макушке. Техника непростая. Делать такую стрижку в домашних условиях без соответствующего опыта мы не советуем. Тем более что настоящему эксперту в парикмахерском деле вы сможете показать фотореференсы в качестве руководства к действию.

Удлиненный боб набок

Этот асимметричный вариант рекомендуют девушкам с квадратной формой лица. Лоб можно частично прикрыть боковой челкой. Волосы оставляют вытянутыми, слегка подкрутив кончики внутрь по направлению к лицу.

Волнистый лонг-боб

На какую укладку с волнистым лонг-бобом ни взгляни, любая подходит для вечернего выхода. Сама по себе стрижка так не ляжет, конечно, но, если задействовать высокотемпературные инструменты и подходящие средства стайлинга, шансы на успех повышаются кратно.

Советуем вооружиться универсальным гель-муссом Transformer от L’Oréal Professionnel и лаком Style Fixer от Matrix.

Вернуться к оглавлению

Техника выполнения стрижки удлиненный боб

Укладка — дело важное, но определяет ее все же стрижка, если речь идет о длинном бобе. Предлагаем попробовать вариант на каждый день. Такая стрижка не требует идеального исполнения. Наша цель — слегка взъерошенный боб, который так любят француженки и не только.

1
Начните с мытья головы. Если волосы пушатся, используйте дисциплинирующие средства с разглаживающим эффектом. Девушки с прямыми прядями могут не изменять привычному базовому уходу или разнообразить его, применив шампунь и маску для объема волос.
2
После душа дайте прядям подсохнуть естественным путем минут 15–20 и нанесите на них термозащиту. Мы очень любим крем Blow Dry от L’Oréal Professionnel. Средство совершенно не ощущается на волосах, что крайне важно для девушек, которые беспокоятся об объеме.
3
Подсушите голову феном, но не до конца — оставьте волосы слегка влажными. Распределите по ним текстурирующий спрей.
4
Если у вас есть насадка-диффузор, сушку можно продолжить с ее помощью, слегка приподнимая пряди у корней. Но справиться без нее тоже не составит труда. Направляя одной рукой поток воздуха на локоны, другой сжимайте их в ладонях, чтобы они обрели модную фактуру.
5
В конце распылите на волосы немного лака. Этот этап можно пропустить, если вы знаете, что укладка сохранится и без дополнительной фиксации.

Вернуться к оглавлению

Укладка лонг-боб

Если вы недавно перешли с каре на лонг-боб, то наверняка оцените, насколько многообразнее могут стать ежедневные образы. Экспериментируйте и получайте удовольствие!

Локоны

Удлиненный боб на волосах средней длины превосходно сочетается с некоторыми видами завивки. Четко очерченные кудри не вариант, а вот ломаные локоны выглядят шикарно и очень актуально, согласитесь!

Прямые волосы и глянцевый блеск

Если утром нужно в офис, а вечером — на вечеринку по случаю дня рождения подруги, сделайте выбор в пользу строгого образа с прямыми блестящими волосами. Выпрямить пряди и сделать их дисциплинированными поможет утюжок.

Ставка на объем

Объем — товарищ капризный, поэтому девушки, которым удается круглый год ходить с пышной укладкой, заслуживают аплодисментов стилиста. Впрочем, девушки со средней длиной волос, выбравшие стрижку лонг-боб, повышают свои шансы на успех. Если нужен прикорневой объем, попробуйте удлиненный боб с градуировкой.

Вернуться к оглавлению

Советы стилистов

Мы разобрались, чем отличается стрижка лонг-боб от каре, кому она идет и как много разных вариантов ее укладки существует. Но пара вопросов для стилистов у нас все же осталась.

Какую прическу выбрать, если у меня непослушные волосы и я ношу удлиненный боб?

Ваш выбор — модная небрежность. Хаос на голове может быть стильным и преднамеренным. Слегка взъерошенные варианты укладки мы демонстрировали выше, а сейчас добавим, что фиксировать такую прическу можно невидимками или маленькими крабиками, забирая, например, пряди только с одной стороны лица.

Как укладывать удлиненный боб с челкой? Пряди у лица быстро теряют заданную укладкой форму и начинают смотреть в другую сторону.

Волосы нужно приучать к новой форме. Для этого ежедневно укладывайте их в нужном направлении, используя стайлинговые средства. Укротить непослушную челку поможет качественный гель средней фиксации.

Вернуться к оглавлению

Audi A8 Long 2010 — цена, характеристики и фото, описание модели авто

Новый Audi A8 long / Ауди А8 лонг способен поразить любого многообразием самых передовых опций и поистине королевским шиком в салоне. Заглянув внутрь флагманской модели марки из Ингольштадта, трудно представить, что можно сделать автомобиль лучше и качественней. Впрочем, хорошего всегда мало и хочется чего-то большего. Потому в длиннобазной модификации представительского седана Audi A8 long / Ауди А8 лонг на тринадцать сантиметров больше качества, комфорта и опций.

3.0 TDI tiptronic quattro3.0 TFSI Tiptronic quattro4.2 TDI tiptronic quattro4.0 TFSI tiptronic quattro

Кузов
Число дверей/мест	4/4
Длина, мм	5267
Ширина, мм	1949
Высота, мм	1471
Дорожный просвет, см	14
Объем багажника, л	510
Тип кузова	Седан

Двигатель
Мощность двигателя, л. с.	250
Тип двигателя	Дизельный
Объём двигателя, л	3.0

Трансмиссия
Коробка передач	АКПП
Привод	Полный привод (4х4)

Эксплуатационные характеристики
Время разгона 0-100 км/ч, с	6.2
Максимальная скорость, км/ч	250

Расход топлива
В городском цикле	8. 0
В загородном цикле	6.6
В смешанном цикле	5.8

Кузов
Число дверей/мест	4/4
Длина, мм	5267
Ширина, мм	1949
Высота, мм	1471
Дорожный просвет, см	14
Объем багажника, л	510
Тип кузова	Седан

Двигатель
Мощность двигателя, л. с.	290
Тип двигателя	Бензиновый
Объём двигателя, л	3.0

Трансмиссия
Коробка передач	АКПП
Привод	Полный привод (4х4)

Эксплуатационные характеристики
Время разгона 0-100 км/ч, с	6.2
Максимальная скорость, км/ч	250

Расход топлива
В городском цикле	13. 1
В загородном цикле	7.1
В смешанном цикле	9.3

Кузов
Число дверей/мест	4/4
Длина, мм	5267
Ширина, мм	1949
Высота, мм	1471
Дорожный просвет, см	14
Объем багажника, л	510
Тип кузова	Седан

Двигатель
Мощность двигателя, л. с.	350
Тип двигателя	Дизельный
Объём двигателя, л	4.2

Трансмиссия
Коробка передач	АКПП
Привод	Полный привод (4х4)

Эксплуатационные характеристики
Время разгона 0-100 км/ч, с	5.6
Максимальная скорость, км/ч	250

Расход топлива
В городском цикле	10. 3
В загородном цикле	6.2
В смешанном цикле	7.8

Кузов
Число дверей/мест	4/4
Длина, мм	5267
Ширина, мм	1949
Высота, мм	1471
Дорожный просвет, см	14
Объем багажника, л	510
Тип кузова	Седан

Двигатель
Мощность двигателя, л. с.	420
Тип двигателя	Бензиновый
Объём двигателя, л	4.0

Трансмиссия
Коробка передач	АКПП
Привод	Полный привод (4х4)

Эксплуатационные характеристики
Время разгона 0-100 км/ч, с	4.7
Максимальная скорость, км/ч	250

Расход топлива
В городском цикле	13. 1
В загородном цикле	7.4
В смешанном цикле	9.5

Джастин Лонг (Justin Long) биография актера, фото, личная жизнь 2022

Биография Джастина Лонга

Джастин Лонг – это актер, имя которого неразрывно связано с жанром комедии. Исполнив на экране огромное множество комедийных ролей, он стал тем актером, одно появление которого, порой, уже самой собой вызывает улыбку.

Но стоит ли называть актерское амплуа этого звездного парня скупым и однобоким? Конечно, нет. Ведь в фильмографии нашего сегодняшнего героя есть множество фильмов, от просмотра которых вам вряд ли захочется смеяться.

Фильмография актера Джастина Лонга началась в конце девяностых

Итак, кто же он этот талантливый парень по имени Джастин Лонг? Понять это поможет вам эта небольшая биографическая статья, посвященная этому чудаковатому обитателю Голливуда.

Ранние годы: становление в качестве актера Джастина Лонга

Будущий известный актер появился на свет второго июня 1978-го года под знаком созвездия Близнецов. В значительной мере именно факт повлиял на жизнь и судьбу нашего сегодняшнего героя. Как и все остальные люди, родившиеся под этим знаком зодиака, Джастин Лонг был всегда весел, общителен, а потому с легкостью заводил новых друзей. Стараясь как-то выразить неуемный творческий потенциал (который также является одной из характерных особенностей «близнецов»), уже в средней школе актер стал часто участвовать в различных театральных постановках, в которых всегда забирал себе все главные роли.

Не противились такому увлечению и родители. Его отец – преподаватель института – самолично подыскал для своего сына хорошую драматическую секцию; а мама – профессиональная театральная актриса – всячески помогала Джастину советами. Однако, справедливости ради, стоит отметить, что подобный либерализм оба родителя нашего сегодняшнего героя проявляли лишь в отношении театральных уроков. В остальном они были достаточно строги со своими детьми, которых выдерживали в жестких канонах католицизма. Так, в частности, среднее образование Джастин и двое его братьев получали в иезуитской школе Фэйрфилда. Воскресное посещение мессы было обязательным ритуалом в их семье.

Джастин Лонг на видео

Возможно, в какой-то мере подобный подход в воспитании детей оказался оправданным. Все трое сыновей в семейства Лонг в итоге стали профессиональными актерами. Дамиан – старший брат Джастина – в настоящий момент часто играет в различных театральных постановках, а также ставит спектакли в престижной школе Вестон Хай. Младший брат – Кристиан – нередко появляется в различных молодежных проектах. В частности, его можно увидеть в фильме «Нас приняли!».

Однако наиболее впечатляющих успехов добился, конечно, сам Джастин. Окончив школу, Джастин Лонг поступил в престижный колледж Вассар, который известен в Соединенных штатах Америки своим умением качественно готовить комедийных актеров. В этом месте Джастин нашел много новых друзей, вместе с которыми принялся совершенствовать свое актерское мастерство. Некоторое время спустя наш сегодняшний герой стал постоянным участником комедийной труппы «Посмешище» (Laughingstock), вместе с которой стал часто появляться на сцене.

Стоит отметить, что данный коллектив стал довольно популярен в некоторых штатах. Первый успех привлек к молодым актерам внимание видных деятелей американского кинематографа, одним из которых стал кастинг-директор компании MGM Дэвон О’Браен. Увидев актерскую игру Джастина Лонга, он предложил молодому парню поучаствовать в рекламе «Пепси». Данная небольшая работа принесла актеру вполне неплохой гонорар, а также свела его на одной площадке с великим и ужасным Клинтом Иствудом.

О подобном опыте работы Джастин тепло отзывается и поныне.

Карьера профессионального актера Джастина Лонга

После успешной роли в рекламе актер вновь вернулся в театральную труппу.

Однако уже в 1999-м году снова появился на широких экранах – на этот раз с комедийной лентой Дина Паризо «В поисках Галактики». Данная актерская работа оказалась удачной. И очень скоро наш сегодняшний герой получил предложение поучаствовать в сериале «Эд». Весьма примечательно, что до этого (еще в подростковом возрасте) Джастин Лонг уже несколько раз снимался в телевизионных сериалах канала NBC, однако тогда ему доставались исключительно небольшие эпизодические роли.

Трейлер: На расстоянии любви с актером Джастином Лонгом.

В телевизионном проекте «Эд» актер задержался на несколько сезонов, однако параллельно с этим активно выстраивал свою карьеру в кино. Так, уже в начале двухтысячных актер снялся в нескольких ярких лентах, наиболее популярными из которых стали фильмы «Перекрёстки», «Вышибалы», «Большая жратва», «Сумасшедшие гонки». Особенно удачной стала роль молодого актера в фильме ужасов «Джиперс Криперс». Данная роль принесла Джастину Лонгу номинацию на премию «Сатурн» в номинации «Лучший молодой актер».

Подобный успех сделал актеру имя и обеспечил новыми интересными ролями. В период с 2006 по 2010-й актер часто снимается в независимом кино и крупных голливудских проектах. Наиболее яркими ролями данного периода можно назвать фильмы «Развод по-американски», «Нас приняли!», «Крепкий орешек 4.0», «Снежный человек», «Обещать — не значит жениться», «Затащи меня в Ад», «Жизнь за гранью», «На расстоянии любви», «Заговорщица».

Данные фильмы сделали нашего сегодняшнего героя известным и узнаваемым персонажем в мире большого кино.

Джастин Лонг сейчас

В настоящий момент актер все также снимается в комедийных проектах, а также часто работает в качестве актера «озвучки». Его голосом говорят персонажи фильмов «Планета 51», «Элвин и бурундуки», «Альфа и Омега: Клыкастая братва» и некоторых других. На сегодняшний день главной мечтой Джастина Лонга является большая драматическая роль, которая могла позволить ему проявить свой талант и открыть новые грани своей личности.

Личная жизнь Джастина Лонга

Несмотря на то, что Джастин Лонг никогда не был признанным ловеласом, в его жизни можно найти парочку романов, о которых стоит упомянуть. Так, после фильма на расстоянии любви у актера завязался бурный роман с актрисой Дрю Бэрримор. Отношения продлились около года и распались по невыясненным причинам.

Личная жизнь бурлит: Джастин Лонг и Кирстен Данст

Некоторое время спустя в американских СМИ стали появляться сообщения о романе Джастина Лонга с другой голливудской дивой – Кирстен Данст. Несколько месяцев спустя правдивость данных слухов подтвердили друзья актеров. Сами же молодые люди тщательно держали свои отношения в тайне от посторонних глаз (и в особенности от посторонних глаз папарацци).

Лучшие фильмы

2016: «Йоганутые»
2013: «Дело в тебе»
2013: «Муви 43»
2007: «Крепкий орешек 4.0»
2006: «Развод по-американски»
2004: «Вышибалы»

Мастер фотографии Лонг Чинсан

Лонг Чинсан – фотограф-новатор, один из пионеров китайской фотожурналистики, автор первых художественных фотографий обнажённой натуры в Китае и создатель уникальной для своего времени техники композитного изображения. Его называют «самой выдающейся фигурой в истории китайской художественной фотографии» и «отцом азиатской фотографии». В 1980 году Американское фотографическое общество включило Чинсана в список из десяти лучших фотографов мира.

Лонг Чинсан (1892-1995) – ключевая фигура в истории китайской фотографии. Родился в округе Хуайань, провинция Цзянсу. Старт его карьеры состоялся в Шанхае, где в 1911-м году Лонг начал работать в газете Shen Bao, освещая новости, события, рекламные сообщения, а также публиковал художественные фотографии в журналах.

Со временем он разработал собственный отличительный стиль, отмеченный туманными пейзажами и изящными композициями флоры и фауны. Свои изображения он создавал в соответствии с композиционными и эстетическими принципами традиционной китайской живописи. Чинсан полагал, что фотографией нужно манипулировать, чтобы она квалифицировалась как «искусство», а художественные формы, служащие руководством для этих манипуляций, нужно находить в канонах традиционного китайского искусства.

Лонг Чинсан в собственные 90-е.

Фотографы, не разделявшие его идеалы, критиковали такой подход. Они высказывались о том, что подражать живописи в фотографии – серьёзная ошибка. Но Лонг оставался сторонником китайского пиктореализма и пронёс свои принципы через всё своё творчество, при этом успел охватить различные жанры. Плодовитый фотохудожник снимал ню и портреты, птиц и цветы, диких животных и натюрморты, горные и морские пейзажи.

Одним из его главных достижений стал метод создания композитного изображения с использованием комбинированной печати и других фотолабораторных методов для соединения разрозненных фотографических фрагментов на одном листе фотобумаги. Например, в снимке «Гребля среди туманных волн», созданном в начале 1950-х годов (ниже), камыши на переднем плане сняты на окраине города Тайбэй; три человека в лодке (два гребца с пассажиром) – в Гонконге; а в качестве фона – знаменитые горы Хуаншань. Подобным способом Лонг создавал и другие многосоставные изображения.

Гребля среди туманных волн, 1951.

Небольшая лодка в Гонконге, 1949 (снимок, использованный в изображении выше).

Эту лодку Чинсан сфотографировал в Гонконге в октябре 1949 года, когда переезжал на Тайвань навстречу туманному будущему. Несмотря на свою известность в Шанхае, когда коммунисты пришли к власти, в 1949 году Лонг последовал за националистическим правительством на Тайвань, где продолжал работать до последних дней. Он посвятил фотографии почти 90 лет жизни, скончался в Тайбэе в 1995 году в возрасте 102 лет. Подборка творений Лонг Чинсана:

Учёный под высокой сосной, 1963.

Одна лодка, пересекающая тысячи рек, 1963.

Причал на реке туманной ночью, 1937.

Пара журавлей, 1967

Цветы.

Пейзаж и павильон, 1986.

Входя в утренний туман.

Без мирской суеты, 1963.

Возвращаясь в закат, 1963.

Швартовка на реке туманной ночью, 1937.

Холодная осень.

1960-е годы.

1984.

1963.

Весна на берегу реки.

Классический танец.

Весенняя фантазия.

Учёный под бамбуком.

Художник Чжан Дацянь.

Пики.

Стоя над облаками, 1958.

Непревзойдённый Чжан Дацянь.

Сквозь лист, 1932.

Женщина с горшком, 1933.

Направляясь на рынок.

Чжан Дацянь, портрет.

Эпиксир любви.

1942.

1956.

Символ долголетия, 1949.

Утренний туман, 1936.

Ели, 1938.

Парк, 1950.

На лодке через залив Байюнь, 1975.

Разглядывание, 1931.

Красота за вуалью.

Медитация, 1928.

В 1930 году Лонг Чинсан опубликовал свой «Альбом ню фотографий». Это было первое издание подобного рода в стране. Снимок «Медитация», который он сделал в 1928 году, считают самой ранней ню фотографией из сохранившихся в Китае. А запечатлённую девушку после съёмок избил отец, поскольку позирование в обнажённом виде было постыдным.

Музыка осени.

Добыча, 1936.

Цикада на траве.

Просёлочная дорога.

Любопытная скала по пути вниз.

Преодоление порогов.

Гора Хуан и восход солнца, 1930-е годы.

Павильон у сосны, 1963.

Остров на пути, 1962.

Павильон в сказочной стране.

Величественное одиночество, 1934.

Деревня в тумане, 1984.

Эликсир любви.

Журавль и сосна.

Возрождение весны, 1956.

Смотрите также:

«Визуальные Хокку» Масао Ямамото
«Женщины моря». Фотограф Ивасе Ёсиюки
Фан Хо — вдохновение от китайского мастера
Изысканный живописный мир в фотографии Дон Хонг-Оай
Документальные и скандальные постановочные фотографии от Лю Чжэна
Сюрреалистичные и откровенные фотографии японского мастера Эйко Хосоэ

20 марта, 2018

Телеграм

New! Лонг боб стрижка боб на длинные волосы 83 фото 2022-2023

Стрижка боб на длинные волосы – замечательное решение, если вы собрались избавиться от «косы до пояса». Стричь ухоженные локоны всегда жалко, но удлиненный боб даже на фото выглядит просто роскошно. Кроме того, прически боб позволяют сохранить длину, придавая прядкам изысканную форму.

Однако все модные новинки следует рассматривать критически, выделяя все их достоинства и недостатки. Среди множества причесок женская стрижка боб занимает особое место. Есть один секрет – лонг боб – стрижка на длинные волосы, делает даму значительно моложе. Стрижка длинный боб нравится юным девушкам – она дает возможность показать прелесть лица и локонов.

содержание

А женская прическа лонг боб в моде?
Стрижка боб на длинные волосы с челкой
Стрижка боб на длинные волосы без челки
Стрижка боб на длинные волосы – вид спереди и сзади
Варианты модной укладки

А женская прическа лонг боб в моде?

Знатоки утверждают – период градуированных стрижек уже канул в Лету. В 2022-2023 году их окончательно сменят графичные, четкие каре и боб. Не стоит думать, что все откажутся от каскадов и градуировки – ведь многим идут такие стрижки. Но стрижку боб на длинные волосы называют самой графичной, а это несомненный признак ее актуальности.

У такой прически немало достоинств:

ее называют эталоном изысканной классической прически.
лонг боб стрижка на длинные волосы – универсальная прическа, востребованная в разных сферах, в светском обществе, в офисе.
она практична, не требует сложной укладки.

кудрявые волосы украсят боб

Градуированные стрижки не в фаворе, но стилисты верны себе. Многие женщины выбирают модные стрижки боб на длинные волосы, чтоб их локоны выглядели густыми, тяжелыми. Опытные мастера знают, как этого добиться. Для создания упомянутого эффекта они применяют легкую градуировку самых кончиков прядок.

Стрижка боб на длинные волосы с челкой

Мы уже говорили, что стрижка длинный боб универсальна, подходит всем, не имеет возрастных ограничений. Деловые женщины часто выбирают эту стрижку, поскольку идеально гладкие пряди придают их образу сдержанность. Среди многих женских причесок именно этот вариант сейчас невероятно популярен. Стрижка боб на длинных волосах для женщин без укладки – замечательная возможность великолепно выглядеть без хлопот.

Однако многие дамы предпочитают прически с челкой. Во многих случаях это оправдано. Так, вытянутое лицо станет выглядеть более округлым и нежным.

Самые модные челки:

прямая короткая, не доходящая до бровей на 2,5 см;
длинная густая, закрывающая брови;
ретро-челка, с укладкой на бок;
челка, заплетенная в косичку, открывающая лицо.

Сделать челку прямой нетрудно, понадобится обыкновенный ободок или повязка. Тот же длинный боб стрижка на фото смотрится неузнаваемо, если кончики локонов закручены к шее. Можно использовать противоположный вариант – закрутив кончики от шеи. Тем самым вы создадите потрясающий образ эффектной деловой леди, или легкомысленной барышни.

Стрижка боб на длинные волосы без челки

Стрижки удлиненный боб на длинных волосах, фото которых мы внимательно рассматриваем в журналах, разнообразны. Если у вас идеальный овал лица, не требующий даже легкой коррекции, обходитесь без челки. Этот вариант нередко выбирают барышни, дамы, у которых нет свободного времени.

Отсутствие челки дает возможность им молниеносно менять имидж:

Собирать волосы в непритязательный хвостик.
Распускать локоны до плеч.
Заплетать тугую или свободную, простую или сложную косичку.

Именно так используют стрижки боб на длинных волосах в 2022-2023 году мобильные и спортивные девушки. Такая же тенденция будет сохраняться примерно еще два года. Длина волос при этом может существенно разнится. Стрижка боб сзади коротко спереди длинно – весьма необычный и экстравагантный вариант. Его выбирают неординарные дамы и девушки, не боящиеся смелых решений.

Стрижка боб на длинные волосы – вид спереди и сзади

Прическу боб на длинных волосах с фото часто разыскивают в интернете самые большие модницы. Им хочется знать, в чем состоят нюансы этой стрижки, почему она актуальна. В текущем сезоне удлиненный боб предполагает разную, необычную длину волос – спереди длиннее, сзади – короче.

Внимательно рассмотрите вид спереди и сзади у этой стрижки, выглядит она действительно оригинально. Возможно, это именно ваш вариант.

Для окрашивания волос, постриженных таким образом, используется самые разные техники:

Бейбилайтс;
Омбре;
Коломбре;
Сомбре;
Балаяж;
Шатуш.

отлично смотрится на вьющиеся волосы

Сейчас широко используется и классическая стрижка боб с длинным затылком. Волосы выпрямляют до идеальной гладкости, либо придают локонам легкую волнистость. Стрижка боб длинная сзади на фото может выглядеть совершенно неузнаваемое, если украсить ее мелкими косичками.

Варианты модной укладки

Стрижку удлиненный боб на длинные волосы мастера не зря называют уникальной. К ней можно применить множество укладок, каждая из которых сделает прическу неповторимой. Экспериментировать с укладками можно без конца.

Чаще всего используют:

Классический вариант. Волосы следует просушить, гладко зачесать за уши, открыв лицо. Если челка короткая, либо имеет среднюю длину, пригладить ее, выделив пробор, когда он необходим.
Укладка а-ля Мэрилин Монро. С помощью такой завивки легко создать романтический образ. Стрижка длинный боб до плеч позволяет формировать локоны от корня. Это создает максимальный объем. После завивки локоны выкладывают на голове в нужном порядке. Чтобы красивая прическа продержалась подольше, ее фиксируют с помощью лака.
Ретро-укладка. Стрижка боб одна сторона длиннее позволяет сделать особую завивку. Медийные особы с красных дорожек в последнее время часто используют такие укладки. Голливудские волны они создают с помощью щипцов, укрепляя их лаком.
Универсальная укладка. Эта прическа уместна всюду – в офисе и на праздничном мероприятии. Локоны увлажняют специально предназначенным муссом, разделяют на идентичные прядки, накручивают на папильотки. Пользуясь феном, просушивают локоны «теплым воздухом». Затем снимите папильотки, прядки распределите руками.

Стрижка боб на длинных волосах до и после таких укладок выглядит просто неузнаваемо. Стоит потратить на работу с локонами немного времени – ваша неотразимая внешность удивит и обрадует окружающих.

Long Overdue от Devoted Creations

Каталог

Помощь в выборе
Новинки 2022 года
Новинки 2021 года
Кремы для солярия
- Активаторы загара
- Бронзаторы (натуральные)
- Бронзаторы мощные
- Масла для загара
- Для начинающих
- Для загара лица и декольте
- Для загара ног
- Специально для мужчин
- С защитой татуировок
- С эффектом охлаждения
- Без тингла, без бронзаторов
- С тинглом, без бронзаторов
- С тинглом, с бронзаторами
- После загара
Аксессуары для солярия
Загар без солнца и солярия
- Автозагары для лица
- Автозагары для тела и лица
- Автозагары спреи
- Гели автозагары
- Лосьоны автозагары
- Кремы автозагары
- Масло автозагары
- Муссы автозагары
- Для бальных танцев
- Перчатки для автозагара
- Скрабы для тела и лица
- Продление загара
Для поездки на море
- Усиление загара на солнце
- Солнцезащитные с SPF
- SPF 2-10
- SPF 15-20
- SPF 30
- SPF 50 и больше
- Увлажнение и продление загара
Профессиональный уход
- Гели для душа
- Сухие шампуни
- Шампуни и кондиционеры
Домашние солярии
Дезинфекция и стерилизация
- Аксессуары
- Для рук и поверхностей
- Антибактериальные салфетки
Бренды
- ALOHA
- AUSTRALIAN GOLD
- B. TAN
- Be3
- BROWN SUGAR
- CALIFORNIA TAN
- CARIBBEAN GOLD
- CURASANO
- DESIGNER SKIN
- DEVOTED CREATIONS
- ED HARDY TANNING
- EMERALD BAY
- FIESTA SUN
- FIRST TAN
- HEMPZ
- JAMES READ
- KARDASHIAN GLOW
- MineTan
- O’LALA
- OTTANTE
- PRO TAN
- RADICAL TAN
- RESTORED
- SOLEO
- SOLEIL NOIR
- SUNMAXX
- SpaFUSION
- SUPERTAN
- SUPRE
- SWEDISH BEAUTY
- TABOO
- TAN ASZ U
- TANNYMAXx
- THAT’SO
- THE POTTED PLANT
- WHITE to BROWN
Крема для защиты от солнца

Отзывы о нас

Акции

Производитель	DEVOTED CREATIONS
Серия	Intensity
Тип средства	Бронзаторы (с ДГА) (показать аналоги)
Назначение	Для тела (показать аналоги)
Особенности	Гипоаллергенный (показать аналоги)
Тип кожи	3 тип (смуглая)

С Long Overdue также смотрят

Уход за кожей (еще)

Ottante Make Up Fixing

Фиксирующая основа. Жидкий праймер в формате спрея без газа позволяет…

50 ml

2 500 руб

Подробно

Шампунь/кондиционер (еще)

Hempz Shampoo Pomegranate

Шампунь HEMPZ Гранат Растительный шампунь легкой степени увлажнения…

265 ml

2 340 руб

Подробно

После загара (еще)

-15%

Saltwater Sundays

Отдых на море. Уход за лицом и телом. Ультра-питательный…

550 ml

3 083 2 621 руб

Подробно

Уход за кожей (еще)

Стикини

Стикини для солярия с защитой родинок Рекомендуется для использования не…

	50 шт	140 руб
	1 шт	3 руб

Подробно

Бронзаторы (с ДГА) (еще)

-15%

Bronze Have More Fun

Смягчающий кожу сатиновый ДГА бронзатор на основе кокоса. Детокс -…

	250 ml	3 466 2 946 руб
	15 ml	454 386 руб

Подробно

Солнцезащитный крем (еще)

That’so All In One SPF 20/30/50+ Tattoo Guardian

Солнцезащитный спрей с прогрессирующим SPF 20/30/50+ для защиты татуировок…

175 ml

2 720 руб

Подробно

Уход за кожей (еще)

Hempz Triple Moisture Herbal Whipped Creme

Травяной крем для тела с эксклюзивным комплексом Triple Moisture…

500 ml

3 080 руб

Подробно

Шампунь/кондиционер (еще)

Hempz Shampoo Triple Moisture

Шампунь HEMPZ Тройное увлажнение Растительный шампунь супер-интенсивной…

265 ml

2 340 руб

Подробно

После загара (еще)

That’so All In One After Sun

Микроэмульсия для ухода после загара с активатором загара. ..

200 ml

2 380 руб

Подробно

500+ лучших длинных изображений [HD]

500+ лучших длинных изображений [HD] | Скачать бесплатные изображения на Unsplash

A Photophotos в рамке 10K
Стоп фотосколков 8.1K
Группа людей 6,8K

Outdoor

Nature

Этазоотавление

Landscape

Long Extufien

Изображения и изображения деревьев

Изображения и изображения пейзажей

Канада

parc national du mont-mégantic — secteur de franceville

scotstown

Hd blue wallpapers

highway

speed

Tree images & pictures

Travel images

transport

Hd purple wallpapers

Hd neon wallpapers

Светлые фоны

quảng ninh

hạ long bay

thành phố hạ long

san francisco

Изображения животных

united states

lapse

exposure

bangkok

thailand

wat samphran

Hd sky wallpapers

light trail

night

trondheim

norwegen

Hd water wallpapers

–––– –– –– –––– – –––– – –––– –– – –– –––– – – –– ––– –– –––– – –.

дорога

светлый фон

длинная выдержка

новая зеландия

космические снимки

castle hill

Hd grey wallpapers

grenoble

france

vietnam

hạ long

hà phong

Hd android wallpapers

Hd iphone wallpapers

sony

washington

usa

washington monument

голестан

иран

асфальт

женщины изображения и изображения

магог

изображения и изображения людей

cianote

Бразилия

Женская

Связанные коллекции

Длинный экспозиция

549 Фотографии · Куратор Rowan Heuvel

Длинные выходные

443 Фотография · Custed By Tracyy Hoping

443.

мост

Изображения и изображения деревьев

Изображения и изображения пейзажей

Новая Зеландия

Изображения и изображения космоса

Castle Hill

Hd android wallpapers

Hd iphone wallpapers

sony

washington

usa

washington monument

Women images & pictures

magog

People images & pictures

cianorte

brazil

female

road

Светлые фоны

Длинная выдержка

Синие обои Hd

Шоссе

Скорость

Вьетнам

Hạ Long

Hà Phong

Quảng Ninh

Hạ Long Bay

Thành Phố Hạ Long

Golestan

Иран

TARMAC

HD Sky Wallpapers

Light Trail

HD Sky Wallpapers

Light Trail

HD Sky Wallpaper ––– –––– – –––– ––––– –– – –– –––– – – –– ––– –– –––– – –.

Канада

Национальный парк Мон-Мегантик — Сектор Франсвиль

Скоттаун

Серые обои Hd

Гренобль

Франция

Деревные изображения и картинки

Images

Транспорт

HD Purple Wallpapers

HD Neon Wallpapers

Light Founds

Связанные коллекции

LOD Exposiute

549 Photos

LONG Exposiut длинные выходные

443 фото · Куратор Трейси Хокинг

Длинный рукав

284 фото · Куратор Алекси Кальзадилья

Сан-Франциско

Animals images & pictures

united states

lapse

exposure

bangkok

thailand

wat samphran

trondheim

norwegen

Hd water wallpapers

Sven Huls

bridge

Tree images & pictures

Пейзажные изображения и картины

Дэвид Беккер

дорога

Светлый фон

длинная выдержка

–––– –––– –––– – –––– – –––– –– – –– – ––– – – –– ––– –– –––– – –.

Thomas Lardeau

canada

parc national du mont-mégantic — secteur de franceville

scotstown

Hamish Dowson

new zealand

Space images & pictures

castle hill

David Becker

Hd blue wallpapers

шоссе

скорость

Alexis Fauvet

Hd серые обои

grenoble

france

David Becker

Tree images & images

Travel images

transport

Alex Azabache

vietnam

hạ long

hà phong

Dollar Gill

Hd android wallpapers

Hd iphone wallpapers

sony

Emre Karataş

Hd purple wallpapers

Hd неоновые обои

Светлые фоны

Alex Azabache

quảng ninh

hạ long bay

thành phố hạ long

Joshua Sukoff

washington

usa

washington monument

Chris Leipelt

san francisco

Animals images & pictures

united states

Mehdi MeSSrro

golestan

iran

tarmac

Benjamin Sow

lapse

экспозиция

Guillaume Bolduc

Женщины изображения и фотографии

magog

Люди изображения и изображения

Tan Kaninthanond

bangkok

thailand

wat samphran

Garidy Sanders

Hd sky wallpapers

light trail

night

Allef Vinicius

cianorte

brazil

female

David Becker

trondheim

norwegen

Водные обои Hd

Просмотр премиальных изображений на iStock | Скидка 20% на iStock

Логотип Unsplash

Сделайте что-нибудь потрясающее

Фотосъемка с длинной выдержкой: пошаговое руководство

Вы изо всех сил пытаетесь сделать красивую фотографию с длинной выдержкой? Вы хотите изучить основы работы с длинной выдержкой и даже сделать несколько снимков профессионального уровня?

Методы длительной выдержки могут показаться сложными, но на самом деле это не так. Имея немного ноу-хау, вы можете начать получать потрясающие результаты…

…и об этом вся статья. Я собираюсь дать вам простой пошаговый процесс для изображений с длинной выдержкой. К тому времени, когда вы закончите, вы увидите, как легко получить удовлетворительные снимки с первой попытки, и вы будете знать ровно что делать в следующий раз, когда вы столкнетесь с прекрасной возможностью.

Начнем прямо.

Шаг 1: изучите погоду

Фотография с длинной выдержкой может повышаться и понижаться в зависимости от погоды. Если вы посмотрите на кадры с длинной выдержкой в этой статье, вы заметите, что я широко использую облака для создания интенсивного, привлекающего внимание неба.

Поэтому частично облачное небо часто лучше всего подходит для съемки с длинной выдержкой, хотя вы также можете работать с преимущественно облачным или даже угрюмым пасмурным горизонтом. Плоского белого неба (т. е. облаков без текстуры) лучше избегать — как правило, в этих сценах эффект длинной выдержки будет потерян, и в итоге вы получите унылый снимок.

Самое главное, день с безоблачным небом — это хороший день, чтобы выпить с друзьями, а не делать длинные выдержки. Отсутствие облаков означает отсутствие драмы, и, как и в случае с ровным пасмурным небом, длинная выдержка на самом деле не сделает многого.

Шаг 2: Посетите локацию заблаговременно

На фотографии с длинной выдержкой мир выглядит совершенно иначе, чем вы видите его своими глазами. Вы должны увидеть сцену с длинной выдержкой мысленно, представляя вид движущихся облаков или силу моря. И это занимает на — определенно дольше, чем требуется для съемки одиночной композиции с короткой выдержкой.

Чтобы решить эту проблему и убедиться, что вы вернетесь домой с сильным выстрелом или двумя, я рекомендую вам заранее разведать место. Подумайте о любых движущихся объектах, с которыми вы можете столкнуться, таких как облака, вода или даже птицы. Попробуйте определить, как они будут двигаться в день вашей фотосессии с длинной выдержкой (вы можете даже сделать несколько пробных снимков с длинной выдержкой).

Кроме того, используйте приложение для планирования фотографий, чтобы определить, где будет располагаться солнце во время финального снимка, а затем примите меры, чтобы оно не попало в кадр. Почему? Ну, солнце движется по небу, поэтому, если вы включите его в свою композицию, вы получите яркую полосу света, которая обычно делает , а не , отлично смотрятся на волшебном снимке с длинной выдержкой.

Шаг 3. Установите правильное снаряжение (включая штатив)

Фотосъемка с длинной выдержкой не особенно требовательна к оборудованию. Вам нужна камера, и хотя я рекомендую DSLR или беззеркальную камеру, вы даже можете обойтись без смартфона. Вам также может понадобиться фильтр , в зависимости от условий освещения — об этом позже.

Но вам точно, сто процентов делать нужен штатив.

Штатив будет удерживать вашу камеру неподвижно в течение пятисекундной, десятисекундной или даже десятиминутной выдержки. Без штатива вы обязательно получите размытый снимок, независимо от мощности встроенной в камеру стабилизации изображения.

Так что не пропустите. Инвестируйте в качественный штатив, способный противостоять сильному ветру (особенно если вы снимаете у побережья), и он окупится годами.

На этом этапе процесса съемки с длинной выдержкой вам необходимо установить камеру на штатив, а затем установить все соответствующие аксессуары, такие как держатель фильтра (если вы планируете использовать вставные фильтры) и пульт дистанционного управления. спуск затвора (если вы планируете его использовать, хотя вы также можете использовать приложение для удаленной съемки на телефоне или автоспуск камеры).

Примечание. Хотя вам нужно будет установить держатель фильтра на передней части объектива, подождите, чтобы добавить фильтр. Это очень важно!

Шаг 4. Скомпонуйте изображение и заблокируйте фокус

Уточните свою композицию, затем установите фокус.

В общем, вы хотите, чтобы весь кадр был резким от переднего плана до фона, поэтому сфокусируйтесь на гиперфокальном расстоянии (примерно треть пути в сцену). Если вы не можете определить, на чем сфокусироваться, попробуйте использовать калькулятор глубины резкости, такой как PhotoPills.

Если вы используете ручную фокусировку, продолжайте и установите кольцо фокусировки объектива именно там, где вам нужно. Если вы используете автофокусировку, наведите активную точку автофокусировки на главный объект, нажмите кнопку спуска затвора до половины, чтобы включить фокусировку, затем переключите объектив с Автофокус на Ручной . Таким образом, фокус останется заблокированным, даже если вы случайно снова нажмете кнопку спуска затвора.

Шаг 5: Установите экспозицию

Теперь пришло время выбрать основные настройки камеры. Во-первых, установите камеру в ручной режим (M) или режим приоритета диафрагмы (A/Av), а ISO установите на самое низкое исходное значение вашей камеры (вероятно, ISO 50, ISO 100 или ISO 200).

Затем установите значение диафрагмы, подходящее для сцены (для пейзажей я предлагаю значение от f/8 до f/11), выберите выдержку в соответствии с рекомендациями вашей камеры и сделайте пробный снимок.

Проверьте свою гистограмму, чтобы определить, правильно ли вы определили экспозицию (не доверяйте своему дисплею, он слишком яркий!). Тест завершен, когда вы получите правильную экспозицию, поэтому отрегулируйте выдержку или компенсацию экспозиции, а затем продолжайте снимать, пока не получите желаемый результат.

(Примечание: это правда, что на гистограмме нет универсально правильного результата, но есть гистограммы, которые всегда неверны, а именно, гистограммы, полностью перекошенные вправо или влево, что указывает на передержку или недодержку соответственно.)

После успешного пробного снимка запишите выдержку, которую вы использовали для этого изображения, затем перейдите к следующему шагу.

Шаг 6. Добавьте фильтр

Теперь добавьте фильтр нейтральной плотности. Если вы снимаете практически в полной темноте и вам не нужна сверхдлинная выдержка (например, вас устраивает выдержка в диапазоне от пяти до тридцати секунд), вы можете снимать без фильтра, но для большинства снимков с длинной выдержкой лучше использовать фильтр.

Если ваш фильтр очень сильный (например, 10 ступеней), вы не сможете видеть в видоискателе или в режиме Live View. Однако не беспокойтесь — если вы следовали руководству до этого момента, вы заметите, что мы уже создали композицию и установили фокус. Вы можете снимать вслепую, но все готово, и ваша камера все прекрасно увидит.

Шаг 7. Переключение в режим лампы

Режим ручной выдержки

позволяет отказаться от тридцатисекундного ограничения скорости затвора вашей камеры, поэтому, если у вашей камеры есть эта опция, я рекомендую ее использовать. Если в вашей камере нет режима Bulb, или если ваш фильтр не особенно темный и/или вы снимаете при ярком освещении, вам может не понадобиться вносить это изменение.

Шаг 8. Рассчитайте правильную выдержку и сделайте снимок с длинной выдержкой

Вы почти у цели; как ты держишься? На этом этапе все, что вам нужно сделать, это определить идеальную скорость затвора, для чего требуется простой расчет.

Помните выдержку, которую вы записали на пробном снимке, сделанном на шаге 5? Теперь вы должны отрегулировать скорость затвора, чтобы компенсировать количество ступеней, введенных фильтром.

Например, если ваш тестовый снимок был сделан с выдержкой 1/15 с и вы используете фильтр на 10 ступеней, вам потребуется уменьшить выдержку на 10 ступеней, чтобы получить выдержку примерно 60 секунд.

(Если вы используете фильтр , а не , вы уменьшите скорость затвора на ноль ступеней.)

И пусть вас не пугает математика. В Интернете вы можете легко найти таблицы преобразования и приложения для своего смартфона, которые сделают преобразование в считанные минуты.

Наконец-то сфотографируйтесь!

Шаг 9: снова проверьте гистограмму

После того, как вы сделали снимок, проверьте гистограмму в качестве последней меры предосторожности.

Если новая гистограмма примерно равна гистограмме тестового снимка, вы выполнили свою задачу (гордитесь!). Но если новая гистограмма смещена слишком далеко вправо или влево, повторите снимок еще раз, но соответствующим образом отрегулируйте скорость затвора.

Фотография с длинной выдержкой: заключительные слова

Итак, вот оно: простое руководство по фотосъемке с длинной выдержкой.

Легко, не так ли? Теперь наполните свой рюкзак камерой и фильтрами и отправляйтесь практиковаться в полевых условиях!

Часто задаваемые вопросы о длительной выдержке

Когда следует фотографировать с длинной выдержкой?

Вы можете делать фотографии с длинной выдержкой в любое время, если у вас есть подходящее оборудование. Я рекомендую начинать с длинной выдержки очень рано утром или очень поздно вечером; таким образом, вы сможете видеть то, что фотографируете, но ограниченный свет позволит делать впечатляюще длинные выдержки. Вообще говоря, Самый простой момент для фотосъемки с длинной выдержкой — это любой момент, когда свет ограничен.

Можно ли делать фотографии с длинной выдержкой при дневном свете?

Да! Однако вам понадобится фильтр нейтральной плотности. В противном случае ваши изображения с длинной выдержкой получатся слишком яркими.

Почему мои снимки с длинной выдержкой белые?

Если ваши фотографии с длинной выдержкой белые, то вы переэкспонируете свои изображения. Вам нужно будет увеличить скорость затвора, сузить диафрагму или уменьшить ISO, чтобы компенсировать эту проблему.

Что означает «длительная выдержка» в фотографии?

Длительная выдержка относится к технике, при которой затвор остается открытым в течение необычно длительного периода времени. Таким образом, вместо того, чтобы снимать изображение за доли секунды, вы нажимаете кнопку спуска затвора и ждете — часто минуты или даже часы — пока экспозиция не закончится!

Как преобразовать живую фотографию iPhone в длинную выдержку

Фотография iPhone

9 января

Автор Крис Фейхтнер

С выпуском iOS 11 Apple добавила живые эффекты для живых фотографий. Вы можете легко использовать стандартное приложение камеры iOS для захвата 3-секундной экспозиции с помощью этих живых эффектов. В этом сообщении блога я расскажу вам о процессе преобразования Live Photo в длинную выдержку в iOS 15 и предыдущих версиях iOS.

Содержание

Что такое живое фото?
Как включить Live Photos
Как преобразовать живое фото в длинную выдержку
- Как преобразовать Live Photo в длинную выдержку в iOS 15
- Как преобразовать Live Photo в длинную выдержку в iOS 14 и более ранних версиях
Как редактировать Live Photo с длинной выдержкой в iOS
Нужен ли мне штатив для съемки Live Photo?
Недостатки длительной выдержки с помощью Live Photo
Резюме

Но сначала (как всегда) вот три примера фотографий с длинной выдержкой, которые я сделал с помощью Live Photos, и процесс, который вы собираетесь прочитать.

Длинная выдержка карусели, преобразованной из Live Photo

Длинная выдержка водопада, преобразованная из Live Photo

Длинная выдержка поезда, преобразованная из Live Photo

Что такое живое фото?

Live Photo — это 3-секундный видеоклип, который можно записать с помощью стандартного приложения для камеры iOS. При съемке Live Photo стандартное приложение камеры будет записывать 1,5 секунды видео до того, как вы нажмете кнопку спуска затвора, и 1,5 секунды после того, как вы нажмете кнопку спуска затвора.

Если долго нажимать на живое фото в приложении «Фотографии» или iMessage, iOS воспроизведет трехсекундный видеоклип.

Apple представила Live Photos в 2015 году с выпуском iPhone 6s и iOS 9 и улучшила их в последующих выпусках. В iOS 11 Apple добавила живые эффекты, которые позволяют применять такие эффекты, как длинная выдержка, зацикливание и отскок, к живым фотографиям.

В этом сообщении блога мы сосредоточимся на живом эффекте с длинной выдержкой, который позволяет превратить любое живое фото в трехсекундную выдержку.

Как включить Live Photos?

Чтобы сделать Live Photo с помощью стандартного приложения камеры iOS, сначала необходимо включить режим Live Photo. В отличие от других режимов съемки, вы должны включить Live Photos, нажав значок в правом верхнем углу приложения камеры.

Чтобы узнать, включены ли Live Photos, проверьте значок Live Photo на панели инструментов в правом верхнем углу экрана в приложении камеры iOS:

Если значок Live Photos белый и перечеркнутый, Live Photos отключены

Если этот параметр отключен и вы коснетесь значка, iOS отобразит значок с краткой надписью «Live», а значок Live Photos станет желтым.

Живые фото включены

Живые фото отключены

Теперь вы готовы сделать Live Photo. После съемки вы можете превратить его в длинную выдержку за несколько шагов.

Apple изменила процесс преобразования Live Photo в длинную выдержку в iOS 15, поэтому в этой записи блога я расскажу об обоих способах: для iOS 15, а также для iOS 14 и более ранних версий.

Как преобразовать Live Photo в длинную выдержку

Чтобы найти Live Photo, которое вы хотите преобразовать в длинную выдержку:

Откройте приложение Photos
Нажмите Альбомы на панели инструментов в нижней части экрана
Проведите вниз до раздела Типы носителей
Нажмите Живые фотографии

Альбом живых фотографий в приложении «Фотографии»

Теперь iOS будет отображать только Live Photos. Необходимые шаги для преобразования Live Photo в длинную выдержку различаются в зависимости от того, используете ли вы iOS 15 или iOS 14 и более ранние версии.

Как преобразовать Live Photo в длинную выдержку в iOS 15

Чтобы преобразовать Live Photo в длинную выдержку в iOS 15:

Коснитесь Live Photo в приложении «Фотографии», чтобы просмотреть его в полноэкранном режиме
В верхнем левом углу вы увидите значок с надписью Live
Коснитесь значка Live , появится раскрывающееся меню
В раскрывающемся меню выберите Длительная выдержка

Как преобразовать Live Photo в длинную выдержку в iOS 15

iOS 15 теперь преобразует Live Photo в длинную выдержку и сохраняет его — никаких дополнительных нажатий не требуется.

Как преобразовать Live Photo в длинную выдержку в iOS 14 и более ранних версиях

Процесс преобразования Live Photo в длинную выдержку требует еще нескольких шагов, если вы используете iOS 14 или более ранние версии.

Коснитесь приложения «Живые фото» в приложении «Фотографии», чтобы просмотреть его в полноэкранном режиме
Проведите вверх по Live Photo, и вы увидите раздел с надписью Effects прямо под Live Photo 9.0004

Проведите пальцем вверх, чтобы открыть живые фотоэффекты

Теперь проведите пальцем влево по разделу эффектов. Эффект Long Exposure , который мы ищем, является последним в этом списке.

Проведите пальцем влево, чтобы открыть эффект длинной выдержки

Теперь коснитесь эффекта длинной выдержки и посмотрите, как только что выбранное вами живое фото трансформируется в 3-секундную выдержку.

Эффект длинной выдержки для Live Photo

Создав длинную выдержку, нажмите кнопку «Назад» в верхнем левом углу.

iOS теперь сохраняет Live Photo как длинную выдержку, но вы всегда можете вернуться к фотографии, коснувшись ее, и удалить эффект длинной выдержки. Снова проведите пальцем вверх по фотографии, а затем выберите Live , чтобы снова превратить ее в простое живое фото.

Как редактировать длинную выдержку Live Photo в iOS

Вы даже можете редактировать длинную выдержку и применять всевозможные корректировки, как и стандартную фотографию.

Коснитесь для отображения Live Photo на весь экран, затем коснитесь изменить в правом верхнем углу экрана. Вы увидите все известные инструменты редактирования для света, цвета и черно-белого изображения. Справа вверху находится диафильм, представляющий все три секунды живого фото, использованного для создания длинной выдержки.

Редактировать продолжительность Live Photo

Теперь перетащите ручку справа или слева. Появится желтый маркер. Перетаскивая одну (или обе) стороны, вы можете изменить экспозицию (от 3 секунд до миллисекунды), используемую для создания длинной экспозиции. Итак, Apple предоставила нам возможность настроить экспозицию длинной выдержки после того, как мы ее сняли. Разве это не потрясающе? (Попробуйте это с классической камерой!)

Нажмите желтую галочку в правом нижнем углу экрана, чтобы сделать настройку постоянной. Помните, что вы всегда можете вернуться к исходной фотографии в фотопленке, перейдя в режим редактирования и коснувшись красной изогнутой стрелки в правом нижнем углу.

Нужен ли мне штатив для создания Live Photo?

Для съемки Live Photo штатив не нужен, но его следует использовать, если вы не можете удерживать iPhone в абсолютно неподвижном положении в течение трех секунд. Причина, по которой я использую штатив для Live Photos, который я планирую преобразовать в длинную выдержку, — это стабилизация изображения.

Из-за того, как работает стабилизация изображения, ваша длинная выдержка будет обрезана, и поэтому вы получите более низкое разрешение изображения. Чтобы проиллюстрировать обрезку, взгляните на следующие две неотредактированные фотографии.

Исходное (необрезанное) фото

Обрезанное изображение с длинной выдержкой из живого фото

Вы можете увидеть обрезку в левом нижнем углу на синей табличке с надписью «Касса» и на расстоянии колеса обозрения от краев кадра. В стабилизированной версии знак «Касса» частично находится за пределами кадра, а колесо обозрения гораздо ближе к краям кадра.

Так работает стабилизация изображения. По сути, он берет каждый кадр видео, слегка поворачивает его, чтобы выровнять их, а затем снова объединяет все отдельные изображения в видео. Если вы стабилизируете дрожащее видео в iMovie, вы заметите тот же эффект. Полученное видео будет немного обрезано.

Итак, чтобы сделать длинную выдержку с помощью Live Photo, либо держите iPhone неподвижно в течение трех секунд, либо используйте штатив. Вот штативы для iPhone, на которые я полагаюсь.

Недостатки съемки с длительной выдержкой с помощью Live Photo

Использование Live Photo — это простой способ запечатлеть трехсекундную экспозицию движущегося объекта. Это точно, и мне нравится использовать этот способ время от времени. Но у него есть и некоторые недостатки, о которых вам следует знать.

Съемка с длинной выдержкой с помощью Live Photos отлично работает при хорошем освещении, но только при хорошем освещении. Если вы хотите сфотографировать световые дорожки ночью, ваши фотографии могут быть зернистыми. Чтобы сфотографировать световые дорожки, я рекомендую посмотреть приложение Slow Shutter Camera. Это одно из приложений, которое я использую для фотосъемки с длинной выдержкой в течение многих лет.
Вы не можете использовать этот способ съемки с длинной выдержкой, чтобы делать хорошо экспонированные и малошумные ночные фотографии. Для такого сценария вам понадобится приложение камеры для слабого освещения с подсветкой ночного режима iOS или ночной режим ProCamera
Время экспозиции ограничено тремя секундами с Live Photos. Если вы хотите использовать более продолжительную экспозицию, вам нужно будет использовать специальное приложение, например вышеупомянутое приложение Slow Shutter Camera.

Резюме

Мне нравится, что Apple предлагает простой способ делать длинные выдержки с помощью Live Photos. Я использую это время от времени в условиях хорошего освещения.

Однако оно не заменит мое любимое приложение для длинных выдержек Slow Shutter Cam по таким причинам, как полный контроль над ISO и выдержкой.

Тем не менее, эффект длинной выдержки для Live Photos в iOS — это отличный способ привыкнуть и поэкспериментировать со съемкой фотографий с длинной выдержкой на iPhone, и я надеюсь, что Apple еще больше улучшит его в следующих выпусках.

Приложения для редактирования фотографийУчебникиПриложение PhotosLong Exposure Photography

Крис Файхтнер

Ich unterstüze Sie dabei, dass Sie SEO und Web-Analytics самостоятельно в ручной nehmen können.

https://nocamerabag.com

Полный путеводитель по работе днем и ночью

В фотографии фокус на способах повышения творческих способностей может действительно выделить вашу работу. Независимо от того, преуспеваете ли вы в освещении, композиции или цвете, важно найти уникальный способ продемонстрировать свою работу. Один из лучших способов создать нестандартные изображения — это поэкспериментировать с фотографией с длинной выдержкой.

Для многих фотографов идея съемки с длинной выдержкой может быть пугающей и сложной. Но снимать с длинной выдержкой не так сложно, как вы думаете. Немного потренировавшись, вы сможете создавать захватывающие кадры с длинной выдержкой в кратчайшие сроки.

Итак, чтобы помочь вам освоить фотографию с длинной выдержкой, мы поделимся несколькими советами и приемами, которые помогут вывести ваши изображения на новый уровень.

Как делать фотографии с длинной выдержкой

Дневная съемка с длинной выдержкой
- Использование штатива
- Ручное управление экспозицией на камере
- Установка фильтра нейтральной плотности
- Вещи для фотографии
  900 Ночь
  - Хватай штатив
  - Найти световые следы и окружающий свет
  - Низкая чувствительность ISO и ручной режим
- Как делать четкие фотографии с длинной выдержкой?
- Креативные способы съемки фотографий с длинной выдержкой
  - Использование правила 500
  - Создание длинных выдержек из живых фотографий
    - Создание живых фотографий с помощью кнопки автоспуска
    - Создание длинных выдержек
  - Смартфон
- Фотосъемка с длинной выдержкой: последние мысли
Если вы новичок в фотографии с длинной выдержкой, вам может быть интересно, что такое фотография с длинной выдержкой. Проще говоря, фотография с длинной выдержкой — это фотографическая техника, созданная с использованием длинных выдержек. Увеличение скорости затвора позволяет запечатлеть размытие, движение и различные массивы света.
Вы можете по-разному использовать фотографии с длинной выдержкой. Для съемки движущихся объектов, таких как автомобили, спортивные состязания или животные. Чтобы запечатлеть следы света. Или даже оба одновременно. Фотосъемка с длинной выдержкой — это действительно забавная и творческая техника.
Связанный пост: Объяснение треугольника экспозиции
Дневная съемка с длинной выдержкой
Теперь, когда мы знаем, что такое фотография с длинной выдержкой, давайте поговорим о том, что вы можете создавать эти композиции в дневное время.
В то время как многие фотографии с длинной выдержкой демонстрируют движение ночи, снижение скорости затвора при дневном свете создает поистине уникальные изображения. Вот несколько советов по съемке с длинной выдержкой в течение дня:
Используйте штатив
Это общее правило для съемки с длительной выдержкой, но оно еще более важно при съемке при дневном свете. Поскольку ваш затвор открыт в течение таких длительных периодов времени, вы хотите сделать все возможное, чтобы уменьшить любое дрожание камеры. И вот здесь в дело вступает штатив.
Поскольку при съемке с длинной выдержкой ваша цель состоит в том, чтобы запечатлеть движение, важно, чтобы некоторые части вашего изображения (неподвижные части) подчеркивались движением. Штатив будет держать все стабильно, чтобы уменьшить дрожание камеры и последующее размытие ваших изображений.
Когда дело доходит до выбора штатива, вам просто нужно убедиться, что штатив остается прочным с камерой на месте.
Возможно, вам также стоит приобрести дистанционный спуск затвора, чтобы камера оставалась неподвижной.
Связанный пост: Лучшие штативы для цифровых зеркальных камер
Ручное управление экспозицией на вашей камере
Если вы снимаете на цифровую зеркальную камеру, у вас должна быть возможность вручную регулировать экспозицию. При съемке при дневном свете вы захотите использовать эту функцию, чтобы иметь возможность полностью контролировать экспозицию. Проверьте текущую передачу на наличие возможности вручную настроить этот параметр.
Установите фильтр нейтральной плотности
Для съемки с длительной выдержкой при дневном свете вы должны использовать с камерой фильтр нейтральной плотности. Эти фильтры уменьшают количество света, попадающего на матрицу вашей камеры.
Эти фильтры представляют собой небольшие удобные инструменты, позволяющие увеличить время экспозиции. Многие эксперты предлагают использовать фильтр на 9 или 10 ступеней для съемки при дневном свете.
Проще говоря, фильтр нейтральной плотности позволит вам сделать снимок с длинной выдержкой, не засветив изображение лишним светом.
Что нужно сфотографировать
Последний элемент дневной фотосъемки с длинной выдержкой — определить, что вы будете фотографировать.
Многие фотографы используют природу в качестве объекта для длинных выдержек. Это включает в себя захват таких элементов, как океан или облака над головой. Вы также можете проверить свою длительную экспозицию в повседневных сценариях, таких как движение людей.
Что бы вы ни выбрали для создания, ваши изображения с длинной выдержкой получатся лучше всего при использовании штатива, ручной экспозиции и фильтра нейтральной плотности.
Ночная съемка с длинной выдержкой
Освоив дневную фотосъемку с длинной выдержкой, вы сможете применять полученные знания ночью. Во многих отношениях фотография с длинной выдержкой в темноте требует тех же элементов, что и дневной свет. Вот несколько советов, которые вам необходимо знать:
Берите штатив
В любое время суток фотографии с длинной выдержкой можно снимать только со штатива. Поскольку дрожание камеры может полностью испортить ваши снимки, соберите штатив, прежде чем отправиться снимать огни города или звездное небо.
Find Light Trails & Ambient Light
Для съемки с длинной выдержкой, которая гарантированно впечатлит, определите количество окружающего света при компоновке изображений.
Окружающий свет поможет вам оценить правильную экспозицию вашего изображения и решить, как долго вы должны держать затвор открытым.
Хорошая новость заключается в том, что даже если у вас не получится с первого раза, вы сможете исправить настройки и снимать снова. Чтобы добавить еще больше творческого чутья, найдите следы света, присутствующие в вашей сцене.
Это могут быть проезжающие машины, огни небоскребов, что угодно, вы можете использовать это! Каждый визуальный элемент добавляет красоты фотографии с длинной выдержкой
Низкая чувствительность ISO и ручной режим
Последний совет для ночной фотосъемки с длинной выдержкой — держите чувствительность ISO как можно ниже и всегда оставайтесь в ручном режиме. ISO в этой ситуации говорит сам за себя, но, по сути, вы не хотите добавлять какой-либо уровень света к своему изображению. Позвольте существующему свету управлять вашей фотографией и освещать объект.
И всегда помните, что ручной режим — ваш друг. Вы хотите иметь полный контроль над своими изображениями. Таким образом, оставляя DSLR в ручном режиме и изменяя настройки по мере необходимости, вы сможете создавать наилучшие фотографии.
Как делать резкие фотографии с длинной выдержкой?
К этому моменту вы должны понимать, как делать фотографии с длинной выдержкой как днем, так и ночью. Но вам может быть интересно, как сделать изображения четкими.
Большинство элементов, которые мы уже упоминали, такие как использование штатива и ручное управление камерой, безусловно, помогут вам создать резкие фотографии с длинной выдержкой. Тем не менее, есть один дополнительный компонент, который следует учитывать при съемке этих изображений: значение диафрагмы.
Диафрагма может быть сложной. Вам нужна низкая диафрагма, чтобы пропускать много света, но вам также нужна диафрагма, которая будет создавать самые четкие изображения. В этом смысле нужно иметь баланс.
Когда дело доходит до выбора правильной диафрагмы, вам, вероятно, придется немного поработать методом проб и ошибок. Когда вы получаете диафрагму, которая предлагает хороший баланс, когда ваши изображения резкие, вы знаете, что попали в нужное место. Обычно вы обнаружите, что диафрагма между f/5.6 и f/8 является хорошей. Этот диапазон известен как сладкое пятно!
Благодаря трем компонентам: штативу, ручному режиму и диафрагме вы гарантированно получите потрясающие четкие изображения с длительной выдержкой.
Креативные способы съемки с длинной выдержкой
Использование правила 500
К этому моменту вы в основном являетесь экспертом по фотографии с длинной выдержкой. Итак, чтобы добавить креативности вашим изображениям, давайте обсудим использование длинных выдержек для астрофотографии.
Съемка ночного неба — одна из основных причин использования длительной выдержки. С этим типом фотографии, чтобы создать самые резкие и красивые изображения, вам нужно понять правило 500.
Правило 500 в фотографии используется фотографами, чтобы удалить следы звезд на фотографиях ночного неба. Формула правила 500: SS = 500 / (FL * CF)
В этом уравнении;
- SS означает скорость затвора
- FL означает фокусное расстояние
- И, CF означает кроп-фактор.
Таким образом, вы можете определить правильную выдержку, умножив фокусное расстояние на кроп-фактор. Затем, разделив это числовое значение на 500.
По данным ExpertPhotography, общие кроп-факторы для камер:
- 1 для полнокадровых камер
- 1,6 для камер Canon APS-C
- 1,5 для камер Nikon с матрицей APS-C
- 2 для камер Micro Four Thirds
- 2.7 или выше для компактных камер с 1-дюймовым сенсором или меньше
Итак, если у вас полнокадровая камера и вы используете объектив с фокусным расстоянием 50 мм, ваша формула будет выглядеть так: SS = 500/(50 * 1) = 500/50 = 10,
Таким образом, используя эти значения, вы получаете выдержку 10 секунд. Если вы настроите камеру на соответствующую выдержку, вы сможете делать снимки без звездных следов. Хотите увидеть, как это работает для вас? Попробуйте сами, используя правило 500!
Создание снимков с длительной выдержкой из живых фотографий
Дополнительный способ добавить креативности к фотографиям с длинной выдержкой — использовать живые фотографии с iPhone. Если у вас есть iPhone, у вас, вероятно, есть коллекция живых фотографий. Это 3-секундные видеоролики, которые снимаются, когда вы нажимаете кнопку спуска затвора, чтобы сделать снимок.
Создание длинной выдержки из вашей живой фотографии включает в себя объединение каждого кадра из клипа в одно изображение. Одним нажатием кнопки ваш телефон сделает всю тяжелую работу за вас, оставив вам креативное изображение с длинной выдержкой.
Стоит отметить, что эта функция доступна только на iPhone 6 или новее с iOS 11 и выше. Хотя есть также приложения, если у вас нет этой функции. Примером этого является приложение Slow Shutter Cam.
Чтобы создать длинную выдержку из живого фото, выполните следующие действия:
Съемка живого фото с помощью кнопки автоспуска
Это гарантирует, что ваше изображение будет устойчивым и камера не будет трястись при нажатии кнопки спуска затвора. Чтобы добавить еще больше стабильности, рассмотрите возможность использования штатива для вашего iPhone. Создайте свое изображение и снимайте!
Создание длинной выдержки
Перейдите в приложение «Фотографии» и откройте одну из своих живых фотографий. Проведите вверх, чтобы открыть панель эффектов. Перейдите в конец списка справа, чтобы найти параметр «Длинная выдержка». Нажмите «Длинная выдержка», и вот оно — ваше собственное изображение с длинной выдержкой из живого фото!
Съемка фотографий с длинной выдержкой с помощью смартфона
Последний урок по фотографии с длинной выдержкой посвящен использованию смартфона.
Возможно, вы только думали, что сможете сделать эти снимки с помощью профессионального оборудования, но подумайте дважды! Вы можете создавать качественные снимки с длинной выдержкой на своем iPhone или Android-устройстве.
Для этого вам понадобится возможность вручную настроить параметры камеры вашего смартфона или использовать приложение, такое как Slow Shutter Cam, чтобы изменить эти значения для вас.
В ручном режиме просто найдите свою выдержку и ISO. Отрегулируйте эти значения соответствующим образом для длинных выдержек. Это означает, что вам нужно уменьшить скорость затвора до одной секунды или дольше, чтобы максимальное количество света попадало на ваш датчик. И вам нужно будет поддерживать минимально возможное значение ISO, чтобы избежать переэкспонирования изображения.
После того, как вы настроите эти два параметра, вы можете приступить к созданию собственных длинных выдержек. Помните, что использование штатива для смартфона сделает ваши изображения еще более четкими и качественными. Лучшие изображения с длинной выдержкой — это те, которые имеют идеальное сочетание фокуса и преднамеренного размытия.
Попробуйте сами и сделайте творческий снимок с длинной выдержкой на свой смартфон.
Фотосъемка с длинной выдержкой: последние мысли
Как видите, существует множество способов овладеть искусством фотографии с длинной выдержкой. От стрельбы днем и ночью до изучения нескольких творческих трюков. Со всем, что мы рассмотрели, вы уже на пути к созданию действительно красивых фотографий.
Есть ли у вас какие-нибудь советы по освоению фотографии с длинной выдержкой? Поделитесь с нами своими мыслями в комментариях ниже!
Оптимизированная фотостимуляция галородопсином для длительного ингибирования нейронов | BMC Biology
- Методологическая статья
- Открытый доступ
- Опубликовано: 27 ноября 2019 г.
- Чуанцян Чжан ^1,2 ^na1 ,
- Шан Ян ³ ^na1 ,
- Том Флоссманн 46 47 ^NA1,
- Shiqiang Gao ³,
- Otto W. Witte ¹,
- Georg Nagel ³,
- Knut Holthoff ^{1 ^{^,}}
и и и и и и . ORCID: orcid.org/0000-0002-9206-214X ¹ ^na2

Биология BMC том 17 , Номер статьи: 95 (2019 г.) Процитировать эту статью

6489 Доступ
12 цитирований
12 Альтметрический
Сведения о показателях

Abstract

Background

Методы оптогенетического молчания расширили причинное понимание функций различных типов нейронных клеток как в здоровом, так и в больном мозге. Широко используемым ингибирующим оптогенетическим приводом является e Np HR3.0, улучшенная версия галородопсина, управляемого светом, хлоридного насоса, полученного из Natronomonas pharaonis . Существенный недостаток е Np HR3.0 связан с его ярко выраженной инактивацией в секундной шкале, что делает его непригодным для приложений, требующих длительного глушения.

Результаты

Используя трансгенных мышей и ооциты Xenopus laevis , экспрессирующие слитый белок e Np HR3.0-EYFP, мы сообщаем об оптимизированных методах фотостимуляции, которые значительно повышают стабильность e Np HR3.0- опосредованные токи при длительной фотостимуляции. Мы демонстрируем, что оптимизированная фотостимуляция обеспечивает пролонгированную гиперполяризацию и подавление разряда потенциала действия в течение нескольких минут.

Выводы

В совокупности наши результаты расширяют полезность e Np HR3. 0 для длительного ингибирования возбудимых клеток, тем самым облегчая оптогенетическое рассечение нервных цепей.

История вопроса

В течение десятилетия оптогенетические инструменты для обратимого молчания нейронов стали неотъемлемым компонентом нейронаучного репертуара. Они облегчают анализ того, как различные популяции нейронов причинно влияют на динамику мозга на клеточном, сетевом и поведенческом уровне, и, кроме того, обещают значительный терапевтический потенциал в различных клинических контекстах [1,2,3]. Оптогенетические инструменты для ингибирования нейронов молекулярно разнообразны, включая активируемые светом хлоридные каналы [4,5,6], калий-специфические циклические нуклеотид-управляемые каналы, слитые с фотоактивируемой аденилатциклазой [7, 8], рецепторы, связанные с G-белком. [9, 10] и ионных насосов [11,12,13,14]. Все приводы, разработанные до сих пор, имеют определенные биофизические ограничения, которые представляют практический интерес при разработке и интерпретации экспериментальных исследований и данных соответственно [15]. Например, светозависимые хлоридные каналы (например, Gt ACR1) обеспечивают ингибирование деления путем шунтирования возбуждающих токов, но направление потока ионов полностью зависит от существующего электрохимического градиента хлорида и, следовательно, может также деполяризовать, а не гиперполяризовать клетки. 16,17,18]. Светоактивируемые рецепторы, связанные с G-белком, работают в более медленных временных масштабах и модулируют канонические сигнальные каскады, которые, помимо снижения возбудимости, могут приводить к нежелательным нецелевым эффектам, например, к изменениям экспрессии генов [19]., 20]. Напротив, ионные насосы, управляемые светом, демонстрируют кинетику включения/выключения в миллисекундном диапазоне и используют субтрактивное ингибирование, что делает их практически независимыми от существующих электрохимических градиентов [21]. Представителем последнего класса актуаторов является e Np HR3.0 [12], улучшенная версия светового хлоридного насоса галородопсина, полученного из Natronomonas pharaonis [11]. Входит в число наиболее широко используемых ингибирующих оптогенетических инструментов, наиболее критическое ограничение e Np HR3.0 является результатом его заметной инактивации, которая относится к снижению амплитуды фототока при непрерывном освещении [11, 22, 23, 24, 25]. Инактивация имеет постоянную времени в диапазоне секунд, что подразумевает ограниченную применимость e Np HR3.0 в экспериментальных условиях, требующих длительного (> 10 с) ингибирования (обзор см. в [15]). Основываясь на данных, полученных для структурно родственных галородопсинов, считается, что инактивация является результатом разветвленного фотоцикла с накоплением интермедиатов, содержащих депротонированное основание Шиффа в 13- цис -ретинальная конфигурация [26]. Возвращение к исходному состоянию, которое включает термическую реверсию к полностью транс -ретиналю, происходит медленно, и лишь немногие опубликованные данные позволяют предположить, что оно может быть ускорено синим светом [11, 22]. Используя как трансгенных мышей, так и ооциты Xenopus laevis , мы здесь систематически исследуем, в какой степени это свойство может быть использовано для повышения временной стабильности фототоков, опосредованных e Np HR3.0. Мы предоставляем и биофизически характеризуем оптимизированные протоколы фотостимуляции, которые значительно снижают инактивацию даже при длительных периодах освещения. Таким образом, наши выводы расширяют пригодность e Np HR3.0 к различным экспериментальным парадигмам, включая ситуации, когда требуется длительное торможение активности нейронов.

Результаты

Синий свет ускоряет восстановление токов, опосредованных e

Np HR3.0, после инактивации в зависимости от продолжительности и мощности

Изучение потенциальных преимуществ альтернативных фото- парадигмы стимуляции, мы экспрессировали слитый белок e Np HR3.0-EYFP в глутаматергических нейронах гиппокампа мышей, используя трансгенный подход (9). 1119 Emx1 ^IREScre :eNpHR3.0-EYFP ^LSL мыши) [27]. Записи фиксации потенциала целых клеток из идентифицированных пирамидных клеток EYFP ⁺ CA1 были выполнены в постоянном присутствии антагонистов потенциалзависимых каналов Na ⁺ (0,5 мкМ ТТХ) и ионотропных рецепторов глутамата и ГАМК (10 мкМ DNQX, 50 мкМ APV, 10 мкМ бикукуллина), чтобы отменить периодическое возбуждение и минимизировать синаптический шум. В соответствии с опубликованными данными фотостимуляция желтым светом (594 нм, 5 мВт на конце оптического волокна) индуцировали внешние токи, которые быстро уменьшались до 34,2 ± 3,0% от начальной пиковой амплитуды в течение 10 с непрерывного воздействия света ( I _пик 62,0 ± 5,8 пА, н = 15 клеток; рис. 1а, б). Мы исследовали восстановление после инактивации с помощью дополнительного тестового импульса 594 нм с различными временными задержками (Δ t ) и обнаружили, что оно было медленным в контрольных условиях (постоянная времени моноэкспоненциальной подгонки, 54,1 ± 2,6 с, н = 7 ячеек; Рис. 1с). Восстановление после инактивации было значительно усилено коротким импульсом синего света (488 нм, 500 мс, 5 мВт) в зависимости от Δ t [взаимодействие (контроль/спасение × Δ t ): F = 17,8 , df = 4, P = 2,9 × 10 ^-9 , n = 7/8 клеток (контроль/спасение), смешанная модель ANOVA; Δ T = 15 S: T (13) = — 12,3, P = 1,5 × 10 ^-8, Δ T = 30 S: T (8.2) = 16,1, P = 1,6 × 10 ⁻⁷, Δ T = 45 S: T (13) = — 12,3, P = 1,6 × ^—8, Δ T = 60 S: T (13) = 12,1, P = 1,9 × 10 ⁻⁸, Δ T = 75 S: T (13) = — 5,1, P = 2,1 × 10 ⁻⁴ , двухвыборочные t испытаний; Рис. 1б, в]. На популяционном уровне постоянная времени восстановления не имела значимой корреляции со степенью инактивации, вызванной исходной фотостимуляцией в возрасте 59 лет.4 нм (коэффициент ранговой корреляции Спирмена = − 0,38, P = 0,16, n = 15 клеток; рис. 1d). Затем мы рассмотрели требования к времени и мощности для реанимационной стимуляции синим светом. В первой серии экспериментов мы систематически изменяли продолжительность светового импульса 488 нм, сохраняя приложенную мощность постоянной (5 мВт). Мы обнаружили, что восстановление после инактивации монотонно увеличивалось с увеличением продолжительности импульса синего света ( F = 575, df = 3,2, P = 3,4 × 10 ⁻²⁸, n = 11 клеток, однофакторный дисперсионный анализ с повторными измерениями, поправка Хюина-Фельдта; Рис. 1д, е). Во второй серии экспериментов мы систематически варьировали мощность светового импульса с длиной волны 488 нм при постоянной продолжительности 1 с. Выход из инактивации существенно зависел от мощности синего света ( F = 529, df = 7, P = 2,3 × 10 ⁻⁶² , n = 12 клеток, односторонняя повторная АНО-ВА; Рис. 1g, h), но насыщается при мощности, близкой к 3 мВт.

Рис. 1

Синий свет ускоряет восстановление e Np HR3.0-опосредованных токов после инактивации в зависимости от продолжительности и мощности. a Образец записи фиксации напряжения, показывающий, что длительная (10 с) фотостимуляция при 594 нм (5 мВт) вызывает выраженную инактивацию токов, опосредованных e Np HR3.0. Обратите внимание, что восстановление после инактивации происходит медленно (испытательный импульс при Δ t = 15 с). b Образец кривой из другой клетки, демонстрирующий, что синий свет (500 мс, 488 нм, 5 мВт) ускоряет восстановление после инактивации. Также обратите внимание на направленный наружу ток, вызванный синим светом. c Восстановление токов, опосредованных e Np HR3.0, усиливается синим светом. Врезка, восстановление определяется как отношение амплитуд тока, вызванного испытанием (при Δ t ) к начальному импульсу, измеренному относительно I _{позднего} (т. ₁ ). Пунктирные линии представляют собой моноэкспоненциальные подгонки к данным о населении. Каждую ячейку тестировали на все значения Δ t либо без (Контроль, n = 7 клеток) или с (Rescue, n = 8 клеток) промежуточной фотостимуляцией при 488 нм (500 мс). В a и b токовые отклики на скачки напряжения - 10 мВ, используемые для контроля сопротивления доступа, обрезаны для ясности (#). d Независимо от степени инактивации (1 − I _{поздние} / I _{пиковые} ), константы времени восстановления ниже для спасения по сравнению с контрольными испытаниями. Каждый символ представляет одну ячейку. e Восстановление после инактивации зависит от продолжительности спасательного импульса длиной 488 нм (синие линии). Все следы от одной клетки. f Количественная оценка. г Восстановление после инактивации зависит от мощности спасательного импульса с длиной волны 488 нм при постоянной продолжительности 1 с. Все следы от одной клетки. ч Количественная оценка. Данные представлены как среднее ± SEM

Полноразмерное изображение

В совокупности наши данные демонстрируют, что синий свет ускоряет восстановление e Np HR3. 0-опосредованные токи от инактивации в зависимости от продолжительности и мощности.

Синий свет ослабляет инактивацию e

Np HR3.0-опосредованные токи во время продолжительной фотостимуляции в зависимости от средней мощности

Затем мы оценили, можно ли аналогичным образом использовать синий свет для предотвращения инактивации e Np Опосредованные токи HR3.0 при совместном применении с фотостимуляцией на длине волны 594 нм. С этой целью мы фотостимулировали клетки с постоянной мощностью 594-нм свет (5 мВт) и систематически варьировали мощность 488-нм возбуждения (рис. 2а, б). Мы количественно оценили этот эффект, определив остаточный ток в конце фотостимуляции ( I _{поздний}) как долю пикового e Np HR3.0-опосредованного тока (т. е. I _{позднего} / I _пик ). Мы обнаружили, что I _{поздний} / I _пик сильно зависел от мощности синего света ( F = 226, df = 3,7, P = 3,1 × 10 ⁻¹⁵, n = 6 клеток, однофакторный дисперсионный анализ с повторными измерениями, поправка Хюина-Фельдта; Рис. 2b) достигает кажущегося насыщения примерно при 3 мВт.

Рис. 2

Костимуляция на длинах волн 594 нм и 488 нм ослабляет инактивацию токов, опосредованных e Np HR3.0, во время длительной фотостимуляции в зависимости от средней мощности. a Образец записи фиксации напряжения для одной ячейки, иллюстрирующий e Np HR3.0-опосредованные токи в ответ на фотостимуляцию при 594 нм (5 мВт) отдельно (вверху) или в сочетании с 488 нм при переменных уровнях мощности (в середине и внизу). Указанные уровни мощности относятся к свету с длиной волны 488 нм. b Зависимость инактивации от мощности 488-нм света. c Спасательный эффект света с длиной волны 488 нм на инактивацию токов, зависящих от e Np HR3.0, зависит от его средней, а не пиковой мощности. Вверху: непрерывная стимуляция 488 нм (слева) одинаково эффективна в ослаблении инактивации по сравнению с импульсной (1 кГц, 20/80% вкл/выкл) стимуляцией при постоянной средней мощности (справа). Внизу : непрерывная стимуляция с длиной волны 488 нм (слева) более эффективна в ослаблении инактивации по сравнению с импульсной (1 кГц, 20/80% вкл/выкл) стимуляцией при постоянной пиковой мощности (справа). d Для количественного определения I _{позднего}, измеренного во время импульсной стимуляции, нормализовали к I _{позднему}, полученному для соответствующих испытаний непрерывной стимуляции. Каждый символ представляет одну ячейку. Данные представлены как среднее ± SEM. ** P < 0,01

Полноразмерное изображение

Далее мы исследовали возможность минимизировать общую мощность синего света, испускаемого с помощью высокочастотной («импульсной», 1 кГц) стимуляции с рабочим циклом 20/80% (вкл./выкл.) путем с помощью акустооптического перестраиваемого фильтра (см. раздел «Методы»). В первой серии экспериментов мы сравнили эффекты непрерывной и импульсной фотостимуляции при постоянной средней мощности либо 3 мВт (рис. 2c, вверху), либо 0,2 мВт, компенсаторно увеличивая пиковую мощность света 488 нм при импульсной стимуляции. испытания. На обоих уровнях мощности нормализовано I _{поздние} амплитуды при импульсной стимуляции достоверно не отличались от таковых, полученных при непрерывной стимуляции (0,2 мВт: 100,7 ± 2,1% от контроля, t (4) = − 0,63, P =

, 9116 910,50,50,50 = 5 ячейки, пары T Тест; 3 МВт: 102,6 ± 1,4% контроля, T (3) = — 1,98, P = 0,14, N = 4 клетки, парные T тест; Fig Figu 2г). В независимой серии экспериментов непрерывная и импульсная фотостимуляция сравнивались при постоянной пиковой мощности света 488 нм либо 3 мВт (рис. 2с, внизу), либо 0,2 мВт, что эффективно снижало среднюю мощность в испытаниях импульсной стимуляции до 20%. В соответствии с приведенными выше данными, импульсная стимуляция при постоянной пиковой мощности была значительно менее эффективной в предотвращении инактивации по сравнению с непрерывным возбуждением, что отражалось в более низких значениях I _{поздний} (0,2 МВт: 63,5 ± 4,0% контроля, T (4) = 7,11, P = 2,1 × 10 ^—3, N = 5 клеток, пары T Тест N = 5 клеток, пары T . ; 3 МВт: 66,9 ± 5,7% контроля, T (3) = 7,14, P = 5,7 × 10 ^-3, N = 4 клеток, парный T тест; фиг. 2D).

Основываясь на том же обосновании и принимая во внимание, что кинетика дезактивации токов, опосредованных e Np HR3.0, находится в диапазоне нескольких миллисекунд, мы затем исследовали потенциальное преимущество импульсных [1 кГц, 20/80% (вкл./выкл.) рабочий цикл] по сравнению с непрерывной фотостимуляцией при 594 нм на фоне непрерывного возбуждения синим светом постоянной мощности (5 мВт). Мы обнаружили, что амплитуды I _{поздних} существенно не отличались между двумя режимами, если средняя мощность света на длине волны 594 нм поддерживалась постоянной на уровне 3 мВт за счет компенсаторного увеличения пиковой мощности в испытаниях импульсной стимуляции (нормализованная I _{поздняя} 96,0 ± 1,6%). Напротив, I _{поздний} был значительно снижен до 81,4 ± 1,1%, если пиковая мощность света на длине волны 594 нм не изменилась (непрерывная/средняя мощность = 3 мВт по сравнению с импульсной/средней мощностью = 3 мВт: P = 0,21, непрерывная/средняя мощность = 3 мВт по сравнению с импульсной/средней мощностью = 0,6 мВт: P = 7,4 × 10 ⁻⁴, апостериорная t-коррекция с 910 Bonferroni 2 теста; F = 46,1, df = 2, P = 2,3 × 10 ⁻⁶ , n = 7 клеток, односторонний дисперсионный анализ с повторными измерениями).

Далее мы исследовали, отражает ли эффект синего света неотъемлемое свойство e Np HR3.0, выполнив дополнительные эксперименты на ГАМКергических интернейронах, экспрессирующих соматостатин (SOM) ( SOM ^IREScre :eNpHR3.0-EYFP ^LSL мыши) [28]. При непрерывной стимуляции при 594 нм (5 мВт) фототоки, опосредованные e Np HR3.0, существенно затухали в течение нескольких секунд (дополнительный файл 1: рисунок S1 A ). Напротив, чередующаяся фотостимуляция желтым и синим светом (1 кГц, рабочий цикл 50/50%, каждый 5 мВт) существенно увеличивалаP = 0,024), в то время как I _Пик был умеренно уменьшен ( T (4) = 5,94, P = 4,0 × 10 ^-3), что приводит к глубокому увеличению I 957). / I _Пик ( T (4) = — 29,0, P = 8,4 × 10 ^—6, N = 5 ячейки, пары T Тесты; А–С ).

Таким образом, наши данные показывают, что синий свет ослабляет инактивацию e Np HR3. 0-опосредованные токи во время длительной фотостимуляции на длине волны 594 нм в зависимости от средней мощности, а не от пиковой мощности. Аналогично, I _{поздний} в значительной степени определяется средней, а не пиковой мощностью излучаемого света с длиной волны 594 нм.

Только синий свет обеспечивает эффективную и стабильную долговременную фотостимуляцию e

Np HR3.0
В то время как предыдущие эксперименты обеспечивают стратегию повышения временной стабильности e Np HR3.0-опосредованные токи, наши первоначальные данные с использованием спасательных импульсов синего света (рис. 1b) уже показали, что фотостимуляция только на 488 нм способна индуцировать направленные наружу токи в e Np HR3.0-EYFP. ⁺ кл. Поэтому мы решили систематически исследовать свойства вызванной синим светом фотостимуляции e Np HR3.0. С этой целью клетки фотостимулировали при длине волны 594 нм или 488 нм при уровне мощности от 1 до 5 мВт (рис. 3а). На каждом рассмотренном уровне мощности I _пик значения были значительно выше для стимуляции желтым светом по сравнению со стимуляцией синим светом (1 мВт: t (6) = − 6,62, P = 5,7 × 10 ⁻⁴:
: T (6) = — 7,35, P = 3,2 × 10 ⁻⁴; 5 МВт: T (6) = — 6,57, P = 5,9 × 10 ^—4;
9 N = 5,9 × 10 ^—4;

9 N = = 7 клеток, парные t тестов, рис. 3а, в). Поразительно, однако, текущие реакции, вызванные фотостимуляцией синим светом, демонстрировали необычайную временную стабильность. Мы количественно оценили этот эффект, определив I _{поздний} / I _пик (рис. 3d), который, как мы обнаружили, значительно выше при фотостимуляции на 488 нм по сравнению с 594 нм (1 мВт: t (6) 1,9= 4 , P = 2,1 × 10 ⁻⁵; 3 МВт: T (6) = 19,69, P = 1,1 × 10 ^—6; 5 МВт: T (6) = 30,21,

9; P = 8,7 × 10 ⁻⁸ ; n = 7 клеток, парные t тестов; рис.

3а, г). Кроме того, в то время как отношение I _{поздний} / I _пик сильно снижался с увеличением мощности для 594-нм света, эта зависимость была значительно слабее при фотостимуляции синим светом (рис. 3а, г). В результате такого поведения абсолютные I _{поздние} амплитуды, вызванные при 594 нм по сравнению с 488 нм, расходились в зависимости от мощности [взаимодействие (594/488 нм × мощность): F = 42,3, df 0= P = 4,6 × 10 ^-4 , двусторонний дисперсионный анализ с повторными измерениями, поправка Хюина-Фельдта; Рис. 3б]. Затем мы попытались определить, в какой степени комбинации синего и желтого света при постоянной общей мощности (5 мВт) могут еще больше увеличить I _{поздний} . Поразительно, но все испытанные комбинации 488/594 нм, а также только 488 нм явно превосходили фотостимуляцию чистым желтым светом, что отражалось в более высоких значениях I _{поздних} (594 нм по сравнению со всеми другими группами: P = 5,1 × 10 ⁻³ или ниже, после HOC T Тесты с коррекцией Бонферрони; F = 71,4, DF = 1,3, P = 2,1 × 10 ^—6, N = 9 ячейки, ОДНО- ОДИН- ОДНО- ОДНО- ОДНО- ОДНО- ОДНО- ОДНО- ОДНО- ОДНО- ОДНО- ОДНО- ОДНО- ОДНО- ОДНО- ОДНО- ОДНО- ОДНО- ОДНО- ОДНО- ОДНО- ОДНО- ОДНО- ОДНО- ОДНО- способ повторных измерений ANOVA, коррекция Хюина-Фельдта; рис.

3д, е). Самые высокие значения I _{поздние} были обнаружены для комбинаций с долей синего света 40–60%, что умеренно превышало значения I _{поздних}, вызванные только 488 нм (рис. 3f).

Рис. 3

Свет с длиной волны 488 нм обеспечивает эффективную и стабильную долговременную фотостимуляцию e Np HR3.0. a Образцы записей фиксации напряжения для одной клетки, иллюстрирующие зависимость от мощности токов, опосредованных ЧСС, вызванных фотостимуляцией на 594 нм (вверху) или 488 нм (внизу), доставляемых при 1 мВт (слева), 3 мВт (в центре) или 5 мВт (справа). Обратите внимание, что фототоки, вызванные на длине волны 488 нм, демонстрируют более низкие пиковые амплитуды, но высокую временную стабильность во всем исследованном диапазоне мощностей. В конце каждого испытания для ускорения восстановления после инактивации использовали свет с длиной волны 488 нм (5 мВт) (обратите внимание на разницу в кинетике начала вызванных токов в зависимости от степени предшествующей инактивации). Токовые отклики на шаг напряжения - 10 мВ, используемые для контроля сопротивления доступа, обрезаны для ясности (#). B — D поздно ( I _{поздний}, B ) и пик ( I _Peak, C ), а также AMPLITUDES 95 95 995 99999999 года 9, а также ARTIO 95 95 999995 года 995 71199 5 9995 года 9995 95 95 5 5 _{_{_{_{). I}}}} _пик ( d ) нормирован на соответствующие значения при 594 нм и 1 мВт ( n = 7 клеток). e Образцы следов одной клетки, фотостимулированной при длине волны 594 нм и/или 488 нм и постоянной общей мощности света 5 мВт. f Количественное определение I _{позднего}, измеренного во время указанных режимов фотостимуляции, нормализованного к I _{позднего}, полученного путем фотостимуляции только при 594 нм (5 мВт). Обратите внимание, что каждая протестированная комбинация 594 нм плюс 488 нм (при постоянной общей мощности) значительно превосходила фотостимуляцию только на 594 нм (пунктирная линия). Каждый символ представляет одну ячейку. Данные представлены как среднее ± SEM. ** P < 0,01, *** P < 0,001

Полноразмерное изображение

В совокупности наши данные неожиданно показывают, что фотостимуляция на длине волны 488 нм отдельно или в сочетании со светом с длиной волны 594 нм существенно усиливает неинактивирующие токи, опосредованные e Np HR3.0, и значительно улучшает их временную стабильность. .

Зависимость от длины волны фототоков, опосредованных e

Np HR3.0, измеренная в ооцитах X. laevis
Затем были выполнены двухэлектродные фиксации напряжения с X. laevis ооцитов, экспрессирующих e Np HR3.0. Сначала мы сравнили инактивацию e Np HR3.0 при длительном (60 с) освещении на трех разных длинах волн: 590 нм, 532 нм и 473 нм. Мы обнаружили, что свет с длиной волны 590 нм может индуцировать самые высокие начальные амплитуды фототока, но также показал самую сильную инактивацию (рис. 4a–c) по сравнению со светом с длиной волны 532 или 473 нм той же интенсивности (2,6 мВт / мм). ² ; F = 345, df = 2, P = 6,4 × 10 ^-7 , n = 4 клетки, односторонний дисперсионный анализ с повторными измерениями, рис. 4c). Затем мы подтвердили, что инактивация e Np HR3.0 зависит от мощности света. Инактивация фотооборота стала более заметной с увеличением мощности при 590 нм или 532 нм (590 нм: F = 194, DF = 2,05, P = 1,1 × 10 ^-7, N = 5 клетки, один. ANOVA с повторными измерениями с поправкой Гринхауза-Гейссера, 532 нм: F = 21,3, df = 1,11, P = 0,007, n = 5 клеток, однофакторный дисперсионный анализ с повторными измерениями с поправкой Гринхауза-Гейссера; Рис. 4г). В соответствии с нашими результатами, полученными на мышах, не наблюдалось явной инактивации света с длиной волны 473 нм при мощности до 6,6 мВт/мм = 5 ячеек, однофакторный дисперсионный анализ с повторными измерениями с поправкой Гринхауза-Гейссера; рис. 4d).
Рис. 4
Инактивация и восстановление e 9 в зависимости от длины волны1119 Np HR3.0 в ооцитах X. laevis . a Образец следов фототока e Np HR3.0 при стимуляции в течение 60 с при 590 нм, 532 нм или 473 нм при постоянной интенсивности (2,6 мВт/мм ² ). b , c Количественное определение начального пикового тока ( I _{пикового}), остаточного тока в конце освещения ( I _{позднего}) и отношения I 6 позднего I _пик . d I _{поздний} / I _пик при 60-секундном освещении на 590 нм, 532 нм или 473 нм при различной интенсивности света ( n 5 ячеек = 9109). e Образец следа фототока e Np HR3.0. Инактивацию вызывали 60-секундным световым импульсом с длиной волны 590 нм (2,6 мВт/мм ² ). Восстановление исследовали световыми импульсами длительностью 10 мс (590 нм, 2,6 мВт/мм ² ) через 1, 5, 10, 20, 40, 60, 120 и 300 с после первоначального 60-секундного освещения. f Количественная оценка извлечения e Np HR3.0 ( n = 8 клеток). 91 283 г 91 094 Кривые образца трех разных клеток в масштабе пика, демонстрирующие, что синий (473 нм) или фиолетовый (400 нм) свет (2 с, 1 мВт/мм ²) ускоряет восстановление после инактивации (на 5 с). Обратите внимание на направленный наружу ток, вызванный синим светом. ч Количественная оценка извлечения как в г . i Образцы в масштабе пика из одного ооцита, иллюстрирующие e Np Фототоки HR3.0, вызванные освещением только на 590 нм (2,6 мВт/мм ²) или совместным освещением либо с 473 нм (1 мВт/мм ²), либо с 400 нм (1 мВт/мм ^{) 2}). j Количественное определение I _{позднего} / I _{пикового} как в i . k Образцы следов одного ооцита, иллюстрирующие фототоки e Np HR3.0, индуцированные освещением только при 473 нм (6,6 мВт/мм ² ), при одновременном освещении при 590 нм (2,6 мВт/мм ² ) и 400 нм (1 мВт/мм ² ) или при совместном освещении на 532 нм (6,6 мВт/мм ² ) и 400 20м4 мВт4 (1 ) ). L , M Количественная оценка
9 I _Peak, I _{поздний} и
9 I _{Поздний} / I _PEAK AS 3. Все измерения проводились в растворе Рингера (pH 7,6) при удерживающем потенциале − 40 мВ. Данные представлены как среднее ± SEM. * P < 0,05, ** P < 0,01, *** P < 0,001. c , h , j , m Звездочками отмечены уровни значимости апостериорных тестов t с поправкой Бонферрони после однофакторного ANOVA ( h ) или однофакторного повторного измерения 91 ANOVA ( c , j , m )

Изображение в полном размере

После 60-секундного освещения на длине волны 590 нм e Np HR3.0 медленно восстанавливается после инактивации со взвешенной постоянной времени 200 с ± 45 в темноте ( F = 231, df = 1,29, P = 5,3 × 10 ⁻⁸, n = 8 клеток, однофакторный дисперсионный анализ с повторными измерениями, коррекция Гринхауса-Гейссера). Поэтому мы рассмотрели вопрос о том, можно ли ускорить восстановление с помощью коротковолнового света. В то время как световые импульсы (2 с, 1 мВт/мм ² ) при 473 нм или 400 нм ускоряли восстановление после инактивации, фиолетовый свет оказался значительно более эффективным (контроль по сравнению с 473 нм: P = 0,047; контроль против 400 нм: P = 1,4 × 10 ^-3 ; 473 нм по сравнению с 400 нм: P = 0,037; апостериорные тесты t с поправкой Бонферрони; F = 23,6, df = 2, P = 1,4 × 10 ^-3 , n = 3 клетки, однофакторный дисперсионный анализ, рис. 4g, h).

Затем мы проверили, может ли коротковолновый свет ослабить инактивацию e Np HR3.0 при совместном применении с желтым светом. Мы обнаружили, что комбинация света с длиной волны 590 нм (2,6 мВт/мм ² ) с любым фиолетовым (400 нм, 1 мВт/мм ² ) или синий (473 нм, 1 мВт/мм ² ) свет значительно увеличивал соотношение I _{позднего} / I _{пикового}, при этом фиолетовый свет был более эффективным (590 9n+9m). 473 нм: р = 0,021; 590 нм против 590+400 нм: р = 1,1 × 10 ^{— 3}; 590+473 нм против 590+400 нм: р = 0,012; Пост. t тесты с поправкой Бонферрони, F = 61,3, df = 2, P = 9,9 × 10 ⁻⁴ , односторонний дисперсионный анализ с повторными измерениями, рис. 4i, j). Фиолетовый свет сам по себе вызывал очень небольшие фототоки, если они вообще были ( I ₄₀₀ / I ₄₇₃ = 6,5 ± 1,6%, n = 4 клетки). Основываясь на приведенных выше результатах, мы затем исследовали возможность дальнейшего увеличения амплитуды стабильных фототоков путем изучения комбинации зеленого и фиолетового света. Здесь мощность света с длиной волны 532 нм была установлена равной 6,6 мВт/мм ² , что привело к аналогичной инактивации по сравнению с 59Свет 0 нм при 2,6 мВт/мм ² при отдельном применении (рис. 4d). Интересно, что комбинация света 1 мВт/мм ² 400 нм со светом 6,6 мВт/мм ² 532 нм значительно превзошла комбинацию со светом 2,6 мВт/мм ² 590 нм для более высокой Фото-точные амплитуды и устраненная инактивация ( I _{поздний} / I _Пик для 590+400 нм против 532+400 нм: P = 2,3 × ^—5, Post HOC = 2,3 × ^{—5 9107, Post Hoc 9107. 1119 т тест с поправкой Бонферрони; F = 126, df = 2, P = 1,2 × 10 ^-5 , однофакторный дисперсионный анализ с повторными измерениями; Рис. 4к–м). Кроме того, в то время как свет мощностью 6,6 мВт/мм ² 473 нм сам по себе также индуцировал стабильные фототоки с незначительной инактивацией в течение 60 с ) = 2,75, P = 0,071, n = 4 клетки, парный тест t ; рис. ).}

Инактивация e

Np HR3.0 зависит от pH и хлорида

В основе инактивации Np HR предполагалось депротонирование основания Шиффа [11, 22, 26]. Поэтому мы исследовали влияние внеклеточного pH (pH _из) на инактивацию e Np HR3.0. Ожидается, что при более высоком pH _из основание Шиффа будет легче терять протон. Действительно, повышенная инактивация наблюдалась при увеличении рН _из (9196).1119 F = 321, df = 2, P = 8,5 × 10 ⁻¹⁰ , n = 6 клеток, однофакторный дисперсионный анализ с повторными измерениями, рис. 5а). Более того, поскольку pK _a основания Шиффа сильно зависит от занятости иона хлорида в сайте связывания I Np HR [29], связывание хлорида с Np HR может стабилизировать протонированное основание Шиффа. В соответствии с этим более низкая внеклеточная концентрация хлорида ([Cl ^— ] _из ) вызывала более сильную инактивацию e NP HR3.0 ( F = 201, DF = 1,4, P = 9,7 × 10 ^-7, N = 6 клеток, односторонние повторные измерения ANOVA, коррекция GELARHOUSE-Geisser; фиг. 5б). Чтобы получить представление о механизме восстановления e Np HR3.0 после инактивации (т. е. повторного протонирования основания Шиффа), мы систематически исследовали влияние pH _из, [Cl ^—] _из, а также мембранный потенциал от постоянной времени восстановления e Np HR3.0 в темноте. Восстановление e Np HR3.0 после инактивации может быть ускорено либо снижением pH _{по сравнению с} [тесты на эффекты pH _из: F = 61, df = 2, ×0 P = 2,9 ⁻⁶ ; взаимодействие (pH _из × Δ t ): F = 16,9, df = 2,66, P = 3,3 × 10 ^-5 ; смешанная модель ANOVA, поправка Гринхауса-Гейссера; Рис. 5c] или увеличение [Cl ^— ] _из [тесты для [Cl ^—] _из эффекты: F = 176, df = 3, P = 9,9 × 10 ^-11 ; взаимодействие ([Cl ^— ] _из × Δ t ): F = 49,6, df = 4,97, P = 1,5 04-7×10 9104; смешанная модель ANOVA, поправка Гринхауса-Гейссера; Рис. 5г]. Это указывает на то, что протон для репротонирования основания Шиффа поступает из внеклеточного пространства. Интересно, что нет существенной разницы во времени восстановления e Np HR3.0 при различных мембранных потенциалах наблюдали, когда [Cl ^— ] _из составлял 121 мМ при pH 7,6 [тесты на эффекты мембранного потенциала: F = 3,63, df = 7,0092 P

2 ; взаимодействие (мембранный потенциал × Δ t ), F = 2,14, df = 2,85, P = 0,13; смешанная модель ANOVA, поправка Гринхауса-Гейссера; Рис. 5e)]. В совокупности данные свидетельствуют о том, что протон для репротонирования основания Шиффа происходит с внеклеточной стороны, и его поглощению всегда способствует связывание хлорида, и наоборот.

Рис. 5

Механизм инактивации и восстановления e Np HR3.0. a Снижение концентрации внеклеточных протонов усиливает инактивацию e Np HR3.0. Токи измеряли в том же ооците в растворе Рингера при рН 5,6, рН 7,6 или рН 9,6. b Повышение внеклеточной концентрации хлорида снижает инактивацию e Np HR3.0. Токи измеряли в одном и том же ооците при разных концентрациях хлорида. Буферы с различной концентрацией хлоридов получали путем смешивания раствора Рингера (pH 7,6) и раствора NMG-Asp (pH 7,6) в различном соотношении. c Восстановление фототоков, опосредованных e Np HR3.0, в растворе Рингера при pH 5,6 ( n = 4 клетки), pH 7,6 ( n = 8 клеток) или pH 9,6 (2n = 4 клетки) при удерживающем потенциале - 40 мВ. d Восстановление фототоков, опосредованных e Np HR3.0, при концентрации внеклеточного хлорида 6 мМ ( n = 5 клеток), 16 мМ ( n = 6 клеток), 60 9 мМ ( 9111 мМ = 6 клеток) или 121 мМ ( n = 5 клеток). pH был установлен на 7,6, а удерживающий потенциал на - 40 мВ. Пунктирные линии в c и d представляют собой биэкспоненциальные соответствия данным о населении. e Восстановление e Np HR3.0 (pH 7,6) при удерживающих потенциалах - 100 мВ ( n = 7 клеток), - 40 мВ ( n = 5 клеток) или + 10 мВ2 n = 5 ячеек). В a и b a и b применялся 590-нанометровый свет с интенсивностью 2,6 мВт/мм ², дополнительные 10-мс 590-нм световые плюсы с той же интенсивностью доставлялись через 1, 5, 10, 20, 40, 60, 120 и 300 с после первоначального 60-секундного освещения, как на рис. 4e. Данные представлены как среднее ± SEM. * P < 0,05, *** P < 0,001. a , b Звездочками отмечены уровни значимости апостериорных тестов t с поправкой Бонферрони после одностороннего дисперсионного анализа с повторными измерениями

Полноразмерное изображение

Индуцированная синим светом фотостимуляция e

Np HR 3 .

0 обеспечивает эффективную долговременную гиперполяризацию и ингибирование

Затем мы исследовали, переходят ли превосходные свойства фотостимуляции с использованием коротковолнового света, обнаруженные в экспериментах с зажимом напряжения, в более высокую эффективность долгосрочного ингибирования нейронов. Мы сосредоточились на синем свете, поскольку использование нескольких длин волн потенциально может представлять собой усложняющий фактор в приложениях in vivo (см. раздел «Обсуждение») — несмотря на более низкие амплитуды фототока по сравнению с комбинацией зеленого и фиолетового (рис. 4). ). Используя измерения токовых зажимов пирамидных клеток СА1 в острых срезах мозга мышей, повторяющиеся 1-секундные инъекции тока через пластырь-пипетку использовались для вызова возбуждения потенциала действия в присутствии ионотропных глутаматных и антагонистов рецепторов ГАМК (рис. 6a). Фотостимуляция e Np HR3.0 при 594 нм (5 мВт) в течение 1 минуты подавлял разряд потенциала действия сильно зависящим от времени образом: тогда как возбуждение в ответ на первый тестовый импульс (500 мс после начала световой стимуляции) практически прекращалось , тормозящий эффект практически исчез для второго, а также для всех последующих тестовых импульсов (рис. 6а, б). Напротив, фотостимуляция при 488 нм (5 мВт) надежно ингибировала разряд потенциала действия в течение всего 1-минутного периода освещения [взаимодействие (контроль/488 нм/594 нМ × Тестовое импульс): F = 13,2, DF = 4,6, P = 1,7 × 10 ^-7, N = 10 ячейки, двусторонние повторные измерения, коррекция Huynh-Feldt; Рис. 6а, б]. Кроме того, фотостимуляция желтым светом приводила к выраженной, но преходящей гиперполяризации, тогда как фотостимуляция при 488 нм вызывала высокостабильный гиперполяризующий ответ во всех проанализированных клетках. Соответственно, двухфакторный дисперсионный анализ с повторными измерениями показал весьма значимое взаимодействие между независимыми переменными ( F = 71,2, df = 5,0, P = 3,1 × 10 ⁻²⁰ , n = 10 клеток, поправка Хюина-Фельдта; Рис. 6а, в).

Рис. 6

Фотостимуляция e Np HR3.0 при 488 нм обеспечивает эффективную долговременную гиперполяризацию и ингибирование. a Образец измерений токовых клещей для одной клетки (смещенной примерно до - 65 мВ в состоянии покоя) при повторном воздействии входящего тока постоянной амплитуды либо без фотостимуляции (5 мВт, слева), либо с фотостимуляцией при 594 нм (5 мВт, в центре) или 488 нм (справа) соответственно. Обратите внимание, что стимуляция желтым светом первоначально отменяла возбуждение потенциала действия (#), которое восстанавливалось в течение длительных периодов фотостимуляции. Также отметим, что стимуляция синим светом подавляла возбуждение в течение всего 1-минутного периода на фоне стабильной гиперполяризации. Вставки: текущие ответы на последний тестовый импульс при более высоком временном увеличении (масштабные линейки, 25 мВ, 0,5 с). b Количество потенциалов действия (ПД) в зависимости от количества тестовых импульсов. c Динамика мембранного потенциала во времени (серый — период фотостимуляции). Данные представлены в виде среднего ± SEM. e Np HR3.0 может влиять на [Cl ⁻ ] _в и, следовательно, сдвигать реверсивный потенциал ГАМК _A рецептор-зависимых токов ( E _ГАМК ) в положительном направлении [30]. Поэтому мы количественно определили зависимость от длины волны и продолжительности вызванных фотостимуляцией изменений в E _ГАМК, используя записи токового зажима грамицидинового перфорированного участка от пирамидальных клеток CA1. В присутствии антагонистов ионотропных рецепторов глутамата (10 мкМ DNQX, 50 мкМ APV) и потенциалзависимых каналов Na ⁺ (0,5 мкМ ТТХ) и Ca ²⁺ (100 мкМ CdCl ₂ ) клетки подвергали стимуляции. с насыщающей затяжкой GABA _{Агонист рецептора} изогувацин (100 мкМ, 2 с). Как показано ранее, пиковый мембранный потенциал ( В _пик) в этих условиях приближается к Е _ГАМК [31]. Мы обнаружили, что 30-секундная фотостимуляция на длине волны 488 нм (5 мВт) немного, но значительно сместила пик V _{на + 1,9 ± 0,6 мВ ( t (6) = − 3,119, = 0,020, n = 7 клеток, парный тест t ; рис. 7а, б). Этот эффект был дозозависимым, так как более выраженный сдвиг в В _Пик на +7,2 ± 0,7 мВ ( T (12) = — 9,77, P = 4,6 × 10 ^{— 7}, N = 13 клеток, пары T Test; Fig. Fig. Fig. 7в, г) наблюдали для периода фотостимуляции 120 с (488 нм, 5 мВт). Напротив, фотостимуляция желтым светом в течение 120 с (594 нм, 5 мВт) не оказывала существенного влияния на пик} , n = 10 ячеек, парные т испытание; Рис. 7д, е)). Важно отметить, что мембранный потенциал покоя ( В _отдых) не влиял ни на одну из парадигм фотостимуляции ( P > 0,1, парные тесты t ; рис. 7a–f), что свидетельствует о значительном фототоксическом эффекте. Таким образом, наши данные демонстрируют, что фотостимуляция e Np HR3.0 синим светом не только увеличивает стационарные токи (рис. 3) и изменения мембранного потенциала (рис. 6), но также усиливает активность e Np. HR3.0-опосредованное увеличение [Cl ^—] _в.

Рис. 7

Зависимость нагрузки хлоридами от длины волны и продолжительности из-за фотостимуляции e Np HR3.0. a Образец грамицидинового перфорированного пластыря с записью мембранного потенциала в ответ на распыление изогувацина (Iso, 100 мкМ, 2 с) до (контроль) и после фотостимуляции при 488 нм в течение 30 с (5 мВт). Пунктирные линии обозначают состояние покоя ( V _{состояние покоя}) и пиковое состояние ().1119 В _пик ) мембранный потенциал, измеренный до фотостимуляции. Обратите внимание, что V _пик приблизительно соответствует E _ГАМК в наших условиях записи. b Количественное определение V _{остальное} и V _пик до и после фотостимуляции. c , d Аналогично a и b , но фотостимуляцию проводили в течение 120 с при 488 нм (5 мВт). е , f То же, что и a и b , но фотостимуляция выполнялась в течение 120 с при 594 нм (5 мВт). Опыты проводили на Р4–10. Данные представлены как среднее ± SEM. нс незначительно, ** P < 0,01, *** P < 0,001

Изображение в натуральную величину

е № HR3.0. Мы исследовали эту возможность на срезах гиппокампа, полученных от новорожденных мышей (P3-6), т. е. на стадии развития, когда деполяризующая ГАМКергическая передача управляет синхронизированной сетевой активностью [28, 32]. В соответствии с опубликованными данными [33], фармакологическое ингибирование котранспортера хлорида NKCC1 с помощью буметанида (10 мкМ) в значительной степени устраняло всплески спонтанных постсинаптических токов (ПСС), подтверждая, что синхронизированная сетевая активность строго [Cl ^—] _в — зависит от этого возраста (дополнительный файл 2: рисунок S2 A, B ). Мы предсказали, что в постоянном присутствии буметанида фотостимуляция пирамидных клеток Emx1+ CA1 спасет от всплесков PSC за счет повышения [Cl ^— ] _в . Действительно, после прекращения освещения синим светом (60 с, 5 мВт) кратковременно вновь появлялись всплески PSC (количество всплесков PSC за 20-секундный интервал: до стимула 0,35±0,19, после стимула 4,25±0,66, т (3) = − 6,57, n = 4 клетки, P = 7,2 × 10 ⁻³, парный тест t ; Дополнительный файл 2: рисунок S2 A–C ). Таким образом, эти данные обеспечивают доказательство того, что активация e Np HR3.0 может изменить динамику популяции нейронов из-за сдвига E _GABA . Далее мы пришли к выводу, что такие эффекты могут быть менее выражены в срезах, полученных на более поздних стадиях развития (P11–12), когда KCC2-зависимая экструзия хлоридов более эффективна [34], синхронизированные сетевые события практически отсутствуют, а спонтанные возбуждающие PSCs (EPSCs) в основном отражают миниатюрный релиз. В соответствии с этим прогнозом длительная (5 мин) фотостимуляция с длиной волны 488 нм (5 мВт) не изменила частоту ВПСТ после прекращения стимуляции, и частота ВПСТ оставалась стабильной в течение следующих 10 мин (9).1119 F = 0,99, df = 2, P = 0,41, n = 6 клеток, однофакторный дисперсионный анализ с повторными измерениями; Дополнительный файл 2: рисунок S2 D – F ). Последнее наблюдение также свидетельствует против серьезного фототоксического эффекта на синаптическое высвобождение из-за продолжительной фотостимуляции синим светом.

Обсуждение

На сегодняшний день хлоридный насос e Np HR3.0 является одним из самых популярных оптогенетических инструментов для гиперполяризации возбудимых клеток. Как и многие другие инструменты оптогенетики на основе родопсина, инактивация при освещении светом является основным препятствием, мешающим применению e 9.1119 Np HR3.0 [24]. Здесь мы систематически изучали инактивацию e Np HR3.0, вызванную длительным освещением как в нейронах гиппокампа мыши, так и в ооцитах X. laevis . Мы ожидаем, что конгруэнтные результаты, полученные в этих двух различных системах экспрессии, отражают свойство самого белка, в значительной степени устраняя влияние возможных белок-белковых взаимодействий в системе-хозяине. Инактивация при длительном освещении, медленное восстановление при термическом распаде в темноте и ускоренное восстановление при освещении синим светом e Np HR3.0 одинаково наблюдались в обеих клетках-хозяевах. Кроме того, в обеих системах временная стабильность e Np HR3. 0 улучшается при оптимизированных условиях фотостимуляции, таких как совместное применение желтого и синего света, зеленого и фиолетового света или только синего света.

Биофизический механизм инактивации и восстановления e

Np HR3.0

Инактивация гомолога белка Hs HR из Halobacterium salinarum оказалась следствием накопления М-подобного интермедиата из разветвленного фото- цикл с депротонированным основанием Шиффа [26, 35,36,37]. Таким образом, инактивация Np HR, естественно, относили к аналогичному механизму, но не исследовали в дальнейшем [11, 22]. Чтобы получить дополнительное представление о механизме инактивации e Np HR3.0, мы охарактеризовали эффекты различного освещения и внеклеточных ионных условий. Зависимость инактивации от мощности света и длины волны может быть результатом различных фотохимических процессов, лежащих в основе различных световых раздражителей. Зависимости инактивации от протона и хлорида убедительно подтверждают гипотезу депротонирования основания Шиффа. В отличие от бактериородопсина (BR), где положительный заряд протонированного основания Шиффа уравновешивается его аспартатом D85, в Np HR, этот отрицательный заряд обеспечивается связыванием иона хлорида [38]. Соответственно, снижение концентрации внеклеточного протона или хлорида увеличивает вероятность депротонирования основания Шиффа, хотя предполагалось, что основание Шиффа Np HR никогда не депротонируется во время цикла перекачки хлорида [39,40,41]. Чтобы эффективно транспортировать хлорид, основание Шиффа также необходимо протонировать, чтобы облегчить связывание хлорида. Поэтому Np Промежуточные продукты HR с депротонированным основанием Шиффа стабильны и не откачивают. Действительно, медленная кинетика восстановления после инактивации e Np HR3.0 также согласуется со стабильностью и отсутствием накачки этого М-подобного промежуточного соединения. В совокупности наши данные показывают, что инактивация e Np HR3.0 после длительного освещения обусловлена образованием М-подобного промежуточного соединения с депротонированным основанием Шиффа (рис. 8).

Рис. 8

Предлагаемый фотоцикл из Нп ЧР. Внеклеточный ион хлорида связан с лизином основания Шиффа Np HR в состоянии покоя, с K _m = 16 мМ [11]. Поглощение фотонов (с максимумом при 580 нм) запускает изомеризацию ретиналя и запускает фотоцикл, содержащий промежуточные продукты K (здесь не указаны), L, N и O. Ион хлорида высвобождается в цитозоль при переходе от N к О, а поглощение иона хлора с внеклеточной стороны происходит при восстановлении из О в исходное состояние. HR без связанного иона хлорида склонен к депротонированию основания Шиффа в L-состоянии (обозначено пунктирной линией), что приводит к образованию M. Этот промежуточный продукт является долгоживущим и поглощает так же, как HR 9.1195 410 (или M ₄₁₂ в BR) из Halobacterium salinarum . Поглощение протона для повторного протонирования промежуточного соединения М происходит очень медленно в темноте (незакрашенная стрелка), но быстро после поглощения синего фотона (синяя стрелка). Наши данные подтверждают депротонирование безхлоридного L-состояния (обозначено пунктирной линией)

Полноразмерное изображение

Мы наблюдали, что время восстановления e Np HR3.0 сильно зависит от pH _из, что указывает на то, что протон для репротонирования депротонированного основания Шиффа происходит с внеклеточной стороны. Кроме того, внеклеточный хлорид также может влиять на репротонирование основания Шиффа, регулируя pKa посредством связывания с сайтом связывания I [29].]. В соответствии с этим мы обнаружили, что снижение [Cl ^— ] _из замедляло восстановление e Np HR3.0. Изменения мембранного потенциала всегда будут вызывать противоположные эффекты на связывание протона или хлорида с основанием Шиффа. Соответственно, разницы во времени восстановления при разных мембранных потенциалах не наблюдалось. Интересно спросить, что является источником протонов в сценарии восстановления, вызванного синим светом. Мы утверждаем, что протон находится и с внеклеточной стороны: во-первых, в структурно родственных Hs HR экспериментально доказано, что поглощение протона происходит из внеклеточного канала при восстановлении H ₄₁₀ в исходное состояние за счет поглощения синего света [26]. Во-вторых, в BR насосная активность может подавляться дополнительным синим светом, при котором поглощение синего света приводит к распаду промежуточного продукта M ₄₁₂ в исходное состояние BR ₅₆₈ за счет репротонирования основания Шиффа с внеклеточной стороны [42,43]. ,44] (рис. 8). В-третьих, кристаллографическое исследование предположило, что репротонирование основания Шиффа происходит после изомеризации сетчатки, когда цитозольное межспиральное пространство уже закрыто, предполагая, что протон находится с внеклеточной стороны [45]. Помимо этого, наши выводы могут иметь более широкое применение благодаря их применению для обучения статистических моделей для вычислительного проектирования оптимизированных 9Варианты 1119 Np HR [46].

Коротковолновый свет позволяет оптимизировать пространственно-временной контроль e

Np HR3.0

Инактивация Np HR3.0 во время непрерывного освещения [11, 22] ограничивает его применимость для длительного (> 10 с) нейронального ингибирование (см. также [15]). Однако длительное молчание популяций нейронов обычно является критическим требованием для анализа их участия в сетевых колебаниях и поведении. Здесь мы подтверждаем, что инактивация увеличивается с увеличением мощности зеленого или желтого света (рис. 3), что может быть особенно проблематичным, если уровни экспрессии низкие, как это имеет место во многих трансгенных моделях. Важно отметить, что настоящее исследование показывает, что, независимо от системы экспрессии, инактивация в значительной степени зависит от длины волны и значительно снижается для синего цвета по сравнению с зеленым или желтым светом (рис. 3 и 4). Это может иметь большое практическое значение, так как мощность света внутри ткани уменьшается с увеличением расстояния от кончика волокна [15]. Следовательно, при использовании желтого света клетки, расположенные близко к источнику света (т. е. подвергающиеся воздействию сравнительно высокой световой мощности), будут не только демонстрировать более высокие пиковые амплитуды фототока, но и более выраженную инактивацию, чем те, которые подвергаются большей мощности. расстояния. Другими словами, помимо увеличения временной стабильности e Np HR3.0-опосредованные токи внутри отдельных клеток, ожидается, что синий свет сведет к минимуму различия в инактивации между пространственно распределенными клетками.

Сравнение непрерывного и высокочастотного режимов фотостимуляции показало, что синий свет ослабляет вызванную желтым светом инактивацию e Np HR3.0 в зависимости от средней мощности (рис. 2). Этот вывод оправдывает использование непрерывного освещения синим светом, которое может быть реализовано с использованием более простых аппаратных решений. По сравнению с фотостимуляцией только синим светом совместное освещение желтым светом вызывало неинактивирующие токи еще большей амплитуды. Наибольшие фототоки были обнаружены для комбинаций с долей синего света 40–60% (рис. 3). Временная стабильность e 9Однако токи, опосредованные 1119 Np HR3.0, были максимальными для чистого освещения с длиной волны 488 нм и не усиливались при одновременном освещении желтым светом (рис. 3). В ооцитах аналогичные стабильные фототоки, опосредованные e Np HR3.0, были получены путем комбинирования зеленого с фиолетовым светом, в то время как фиолетовый свет сам по себе вызывал незначительные фототоки при изолированном применении (рис. 4). Кроме того, соответствующие стационарные амплитуды превышали амплитуды, вызванные фотостимуляцией чистым синим светом (рис. 4). Это может сделать комбинацию зеленого и фиолетового света предпочтительным режимом фотостимуляции, если требуются фототоки высокой амплитуды. Однако следует учитывать, что фиолетовый и зеленый свет демонстрируют различное ослабление мощности в тканях мозга, зависящее от расстояния, что может привести к большей пространственной неоднородности, как указано выше.

В целом, в сочетании с быстрой внутренней кинетикой включения/выключения e Np HR3.0 в диапазоне миллисекунд описанные здесь протоколы обеспечивают оптимизированный пространственно-временной контроль фото- активация гибкого торможения нейронов.

Практические соображения

Световые хлоридные насосы используют субтрактивное торможение (т. е. гиперполяризацию) и, следовательно, работают независимо от электрохимического градиента хлорида [21]. Это потенциальное преимущество перед хлорпроводящими канальными родопсинами (например, Gt ACR1), которые действуют в [Cl ^— ] -зависимым образом и, например, могут деполяризовать пресинаптические окончания и вызывать высвобождение нейротрансмиттера [18]. Однако общее ограничение использования ионных насосов для подавления нейронов возникает из-за изменений реверсивного потенциала транспортируемых ионных частиц. Например, было показано, что архаэрродопсин протонного насоса (eArch4.0) индуцирует рН-зависимый приток Ca ²⁺, который усиливает спонтанное везикулярное высвобождение [18]. Аналогично, хлоридный насос e Np HR3.0 может повышать [Cl ^— ] _in,, что сдвигает E _ГАМК и может способствовать деполяризующей ГАМКергической/глицинергической передаче сигналов, которая может противодействовать гиперполяризации e Np HR3. 0-2 , 30]. Здесь мы показываем, что сдвиги E _ГАМК больше при фотостимуляции синим светом по сравнению с желтым светом (рис. 7), что согласуется с увеличением переноса заряда при длительных периодах стимуляции (рис. 3). Пока манипуляции E _ГАМК могут быть полезны, например, для анализа вклада ГАМКергической передачи сигналов в динамику сети в физиологических или патофизиологических условиях [25], они также накладывают экспериментальное ограничение на использование e Np HR3.0 для нейронных молчание. Мы предоставляем правдоподобные доказательства того, что сдвиги E _ГАМК могут временно вызывать аберрантную сетевую активность в период после стимуляции на P3–6 (дополнительный файл 2: рисунок S2 A–C ), тогда как такие эффекты не наблюдались на более поздних стадиях развития (дополнительный файл 2: рисунок S2 D–F ), когда было показано, что экструзия хлорида более эффективна [34]. В общем случае величину сдвигов E _ГАМК трудно предсказать, так как она зависит от нескольких параметров (производительность экструзии хлорида, проводимость покоящегося хлорида и т. д.) и должна быть исследована для данной экспериментальной установки. Кроме того, из-за быстрой кинетики дезактивации e Np HR3.0 резкое прекращение фотостимуляции может привести к рикошетной деполяризации и срабатыванию потенциала действия [30, 47]. Этот эффект обусловлен сетевыми механизмами [28], загрузкой хлоридами и/или активацией потенциалзависимой проводимости (например, H-тока, тока Т-типа Ca ²⁺) и может быть легко ослаблен путем замены ступенчатое прекращение фотостимуляции с более постепенным снижением мощности света [18]. Наконец, хотя наши данные не предоставляют прямых доказательств фототоксичности, вызванной длительным освещением синим светом (рис. 7 и дополнительный файл 2: рисунок S2), фотостимуляция неизменно нагревает ткань и, таким образом, может влиять на ряд зависящих от температуры физиологические процессы. Действительно, тепловые ограничения оптогенетики хорошо задокументированы [48], что еще больше обосновывает необходимость хорошо спланированных контрольных экспериментов.

Выводы

В совокупности наше исследование предлагает новый подход к долгосрочному оптогенетическому молчанию, основанный на оптимизации фотостимуляции, а не на белковой инженерии. Для краткосрочного оптогенетического ингибирования желтый свет остается предпочтительным из-за его способности индуцировать большие фототоки и его благоприятных свойств проникновения в ткани. Однако, когда требуется длительное ингибирование, фотостимуляция синим светом (либо отдельно, либо в сочетании с желтым светом) является предпочтительной из-за его превосходной временной стабильности. Кроме того, наше исследование также предоставляет альтернативные схемы фотомоделирования для долгосрочного ингибирования, поскольку мы наблюдали в ооцитах, что зелено-фиолетовая комбинация превосходила синий свет с точки зрения амплитуд фототока без какой-либо очевидной инактивации. Таким образом, наше исследование предлагает простые в реализации подходы к фотостимуляции для управляемого светом хлоридного насоса e 9. 1119 Np HR3.0, которые связаны с необычайной временной стабильностью токов накачки и, таким образом, делают e Np HR3.0 пригодными для длительного ингибирования нейронов.

Методы

Заявление об этике

Все экспериментальные процедуры проводились с разрешения местного правительства и соответствовали нормам Европейского Союза (Директива 2010/63/ЕС).

Животные

Эксперименты проводили на острых срезах головного мозга, полученных от мышей обоего пола в постнатальный день (Р) 4–13. Пирамидальная клеточно-специфическая экспрессия e 9Слитый белок 1119 Np HR3.0-EYFP был получен путем скрещивания гомозиготных самок мышей Emx1 ^IREScre (The Jackson Laboratory, складской № 005628) [49] с гомозиготными самцами мышей линии Ai39 cre-reporting. штамм (Лаборатория Джексона, инвентарный номер 014539) [50]. Для экспериментов на интернейронах SOM гомозиготных мышей SOM ^IREScre (The Jackson Laboratory, склад № 013044) [51] скрещивали с гомозиготными Ai39. мыши. Животных содержали в стандартных клетках с циклами 12-часовой свет/12-часовой темноты.

Подготовка срезов головного мозга

Животных декапитировали под глубоким изофлурановым наркозом. Мозг быстро удаляли и переносили в ледяной физиологический раствор, содержащий (в мМ) 125 NaCl, 4 KCl, 10 глюкозы, 1,25 NaH ₂ PO ₄, 25 NaHCO ₃, 0,5 CaCl ₂ и 2,5. MgCl ₂, барботирование 5% CO ₂/95% O ₂ (рН 7,4). Горизонтальные срезы головного мозга, содержащие гиппокамп (350 мкм), вырезали на вибратоме и хранили не менее 1 ч перед использованием при комнатной температуре в искусственной спинномозговой жидкости (ИЦЖ), содержащей (в мМ) 125 NaCl, 4 KCl, 10 глюкозу, 1,25 NaH ₂ PO ₄, 25 NaHCO ₃, 2 CaCl ₂ и 1 MgCl ₂, барботировали 5% CO _{2 /95% O 29119. Для записи срезы помещали в записывающую камеру погружного типа на предметном столике микроскопа (Nikon Eclipse FN1, Nikon Instruments Inc. ), оснащенную ближней инфракрасной дифференциальной интерференционной контрастной оптикой (скорость потока ACSF ~ 3 мл мин ^-1). Опыты проводили при температуре, близкой к физиологической (32–34 °С).}

Электрофизиология в срезах головного мозга

Электрофизиологические сигналы были получены с использованием усилителя Multiclamp 700B, 16-битной платы AD/DA (Digidata 1550A) и программного обеспечения pClamp 10 (Molecular Devices). Сигналы подвергались низкочастотной фильтрации на частоте 3 кГц и дискретизации на частоте 10 кГц. Для регистрации фототоков от пирамидальных клеток СА1 пэтч-кламп стеклянные пипетки (4–7 МОм) заполняли следующим раствором (в мМ): 40 KCl, 100 K ⁺-глюконат, 1 CaCl ₂ , 11 EGTA, 10 HEPES, 2 Mg ²⁺ -АТФ и 0,3 Na ⁺ -ГТФ (рН доведен до 7,25 с помощью КОН). Запись зажима напряжения всей клетки выполняли при удерживающем потенциале - 70 мВ. При измерениях фиксации тока в целых клетках потенциал покоящейся мембраны был вручную смещен примерно до - 65 мВ посредством подачи тока. Напряжения не были скорректированы на потенциал жидкостного перехода (LJP). За исключением экспериментов, показанных на рис. 1a–d, импульс синего света (488 нм, 3 с, 5 мВт) обычно применялся в конце каждого испытания стимуляции для ускорения восстановления e 9{\frac{-\Delta t}{\tau}}+c $$

, где Δ t — задержка начала тестового импульса. Смещение c было ограничено 100%.

Из-за высокой межклеточной изменчивости входных сопротивлений амплитуда инжектируемых токов, используемых для возбуждения возбуждения потенциала действия в экспериментах по фиксации тока (см. рис. 4), устанавливалась отдельно для каждой клетки и сохранялась постоянной на протяжении всей записи. Используя серию повторяющихся токовых инъекций (с шагом 1 с, 5 пА), амплитуду определяли по наибольшей ступени тока, которая не индуцировала потенциалы действия при кратковременной (2 с, 5 мВт) фотостимуляции на длине волны 488 нм.

Для регистрации тока с помощью грамицидинового перфорированного участка пирамидальных клеток CA1 стеклянные пипетки заполняли следующим раствором (в мМ): 140 K ⁺ -глюконат, 1 CaCl ₂ , 11 EGTA, 1 MgCl ₂ и 10 HEPES (pH доведен до 7,3 с помощью KOH), дополнительно дополненные 50 мкг/мл грамицидина. Здесь измеренные напряжения были скорректированы в автономном режиме для LJP (16,5 мВ). Записи проводились при нулевом токе.

Записи спонтанных PSC с фиксированным напряжением в целых клетках были выполнены при удерживающем потенциале - 70 мВ без поправки на LJP. На П3–6 стеклянные пипетки заполняли (в мМ) 40 KCl, 100 K ⁺ -глюконат, 1 CaCl ₂ , 11 EGTA, 10 HEPES, 2 Mg ²⁺ -ATP и 0,3 Na ⁺ -GTP (pH доведен до 7,25 с помощью KOH). Всплески спонтанных ПСК визуально выявляли по следующим критериям: (I) длительность > 400 мс и (II) амплитуда > 200 пА. Для измерения ВПСТ на П11–12 стеклянные пипетки заполняли (в мМ) 8 KCl, 140 K ⁺ -глюконат, 1 CaCl ₂ , 11 EGTA, 10 HEPES, 2 Mg ²⁺ -ATP, и 0,3 Na ⁺ -GTP (pH доведен до 7,25 с помощью KOH). EPSC были обнаружены с использованием алгоритма сопоставления с шаблоном, реализованного в pClamp 10.

Молекулярная биология и генетика

e Np ДНК HR3. 0 клонировали в экспрессионные векторы ооцитов на основе плазмиды pGEMHE 22, производной pGEM3z (Promega). Линеаризованную NheI плазмидную ДНК использовали для генерации кРНК in vitro с помощью набора для создания сообщений высокой производительности AmpliCap-MaxT7 (Epicentre Biotechnologies).

Электрофизиология ооцитов

В ооциты X. laevis вводили 30 нг e Np HR3.0 кРНК и инкубировали в среде, содержащей 10 мкМ all-trans -ретиналь за 2 или 3 дня до измерения. Регистрацию фототоков методом двухэлектродной фиксации напряжения проводили в растворе Рингера с различным рН (110 мМ NaCl, 5 мМ KCl, 2 мМ CaCl ₂ , 1 мМ MgCl ₂ , 5 мМ HEPES, pH 7,6; 110). MM NaCl, 5 мм KCl, 2 мм CaCl ₂, 1 мм MGCl ₂, 5 мм MES, pH 5,6; и 110 мм NaCl, 5 мм KCl, 2 мм CACL ₂, 1 мм MGCl ₂ , 10 мМ CAPSO, pH 9,6) или в растворе NMG-Asp (110 мМ NMG, 2 мМ CaCl ₂, 1 мМ MgCl ₂, 5 мМ HEPES, pH доведен до 7,6 аспартатом) при удерживающем потенциале – 100, – 40 или 20 мВ. {\frac{-\Delta t}{ \тау 2}}+с $$

, где Δ t — задержка начала тестового импульса. Смещение c было ограничено 100%. Взвешенная постоянная времени τ _w вычислялась следующим образом:

$$ {\tau}_w=\tau 1\times \frac{a1}{a1+a2}+\tau 2\times \frac{a2}{a1+a2} $$

Оптогенетическая стимуляция

Для при измерениях в срезах головного мозга возбуждение осуществлялось диодным лазером с длиной волны 488 нм (Cobolt MLD 488) и твердотельным лазером с длиной волны 594 нм (Cobolt Mambo), модулированным по интенсивности акустооптическим перестраиваемым фильтром (Gh28A, Gooch & Housego ) и соединены в многомодовое оптическое волокно с числовой апертурой 0,22 и диаметром сердцевины 200 мкм (FG200LCC, Thorlabs GmbH). Кончик волокна располагался на осевом расстоянии ~ 0,5 мм от поверхности СА1. Все указанные уровни мощности были откалиброваны на конце волокна отдельно для каждой длины волны (датчик LabMax-TO и OP-2 VIS, Coherent). Фотостимуляция e Np HR3.0 выполняли с использованием либо непрерывной, либо высокочастотной импульсной стимуляции (1 кГц, вкл/выкл 20/80%). Постоянная времени включения/выключения акустооптического перестраиваемого фильтра составляла ≤ 6 мкс, что было определено количественно с использованием быстрого фотодиода (PDA100A, Thorlabs).

Для измерений ооцитов в качестве источников света использовались лазер с длиной волны 532 нм, лазер с длиной волны 473 нм (Changchun New Industries Optoelectronics Tech), светодиод с длиной волны 400 нм (ProLight Opto Technology) и светодиод с длиной волны 590 нм (WINGER). . Интенсивность света на разных длинах волн измеряли с помощью измерителя оптической мощности Laser Check (Coherent Inc.).

Химические вещества

Химические вещества были получены от Sigma (метиодид бикукуллина), Tocris [DL-2-амино-5-фосфонопентановая кислота (APV), 6,7-динитрохиноксалин-2,3(1H,4H)-дион (DNQX) ] и Biotrend [тетродотоксин (ТТХ)].

План эксперимента и статистический анализ

Данные были проанализированы с использованием pClamp 10, WinWCP, Microsoft Excel и Matlab 2010a/2016a. Статистический анализ проводился с использованием OriginPro 2018, Prism 7 и SPSS Statistics 22/24. Все данные представлены как среднее ± стандартная ошибка среднего (SEM) (дополнительный файл 3). Точные размеры выборки для каждого эксперимента указаны в разделе «Результаты». Критерий Колмогорова-Смирнова использовался для проверки нормальности данных. Процедуры параметрического тестирования применялись для нормально распределенных данных; в противном случае использовались непараметрические тесты. В случае двухвыборочного t тестов и неравные групповые дисперсии применяли поправку Уэлча. В случае множественных сравнений использовали дисперсионный анализ (ANOVA) (апостериорные тесты, указанные в разделе «Результаты»). Значения P (двусторонний тест) < 0,05 считались статистически значимыми.

Доступность данных и материалов

Все данные, полученные или проанализированные в ходе этого исследования, включены в эту статью и ее дополнительную информацию.

Каталожные номера

«>
Klapper SD, Swiersy A, Bamberg E, Busskamp V. Биофизические свойства оптогенетических инструментов и их применение для подходов к восстановлению зрения. Фронт Сист Нейроци. 2016;10:74.
ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый
Мозер Т. Оптогенетическая стимуляция слухового пути для исследований и будущего протезирования. Курр Опин Нейробиол. 2015;34:29–36.
КАС пабмед Статья Google ученый
Буй А.Д., Александр А., Солтеш И. Взятие контроля: от современных методов лечения до оптогенетических вмешательств при эпилепсии. Нейробиолог. 2017;23(1):68–81.
Говорунова Е.Г., Синещеков О.А., Янц Р., Лю Х., Спудич Ю.Л. НЕВРОНАУКА. Природные светозависимые анионные каналы: семейство микробных родопсинов для продвинутой оптогенетики. Наука. 2015;349(6248):647–650.
Виетек Дж., Белтрамо Р., Сканциани М., Хегеманн П., Ортнер Т.Г., Вигерт Дж.С. Усовершенствованный хлорид-проводящий каналродопсин для светоиндуцированного ингибирования активности нейронов in vivo. Научный доклад 2015; 5:14807.
КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый
Берндт А., Ли С.Ю., Витек Дж., Рамакришнан С., Стейнберг Э.Е., Рашид А.Дж., Ким Х., Парк С., Санторо А., Франкленд П.В. и др. Структурные основы оптогенетики: детерминанты ионной селективности каналов родопсина. Proc Natl Acad Sci U S A. 2016;113(4):822–9.
КАС пабмед Статья Google ученый
Бек С., Ю-Стшелчик Дж., Паулс Д., Константин О.М., Джи К.Э., Эманн Н., Киттель Р.Дж., Нагель Г., Гао С. Синтетические активируемые светом ионные каналы для оптогенетической активации и ингибирования. Фронтальные нейроски. 2018;12:643.
ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый
Берналь Сьерра Ю.А., Рост Б.Р., Пофаль М., Фернандес А.М., Коптон Р.А., Мозер С., Холткамп Д., Масала Н., Бид П., Таккер Дж.Дж. и др. Оптогенетическое молчание на основе калиевых каналов. Нац коммун. 2018;9(1):4611.
ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый
Сиуда Э.Р., МакКолл Дж.Г., Аль-Хасани Р., Шин Г., Иль Парк С., Шмидт М.Дж., Андерсон С.Л., Планер В.Дж., Роджерс Дж.А., Бручас М.Р. Оптодинамическое моделирование передачи сигналов бета-адренорецепторов. Нац коммун. 2015;6:8480.
КАС пабмед Статья Google ученый
Masseck OA, Spoida K, Dalkara D, Maejima T, Rubelowski JM, Wallhorn L, Deneris ES, Herlitze S. Опсины колбочек позвоночных обеспечивают устойчивый и высокочувствительный быстрый контроль передачи сигналов Gi/o в цепи тревоги. Нейрон. 2014;81(6):1263–73.
КАС пабмед Статья Google ученый
Zhang F, Wang LP, Brauner M, Liewald JF, Kay K, Watzke N, Wood PG, Bamberg E, Nagel G, Gottschalk A, et al. Мультимодальный быстрый оптический опрос нейронных цепей. Природа. 2007;446(7136):633–9.
КАС пабмед Статья Google ученый
Градинару В., Чжан Ф., Рамакришнан С., Мэттис Дж., Пракаш Р., Диестер И., Гошен И., Томпсон К.Р., Дейссерот К. Молекулярные и клеточные подходы к диверсификации и расширению оптогенетики. Клетка. 2010;141(1):154–65.
КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый
Chow BY, Han X, Dobry AS, Qian X, Chuong AS, Li M, Henninger MA, Belfort GM, Lin Y, Monahan PE, et al. Высокоэффективное генетически нацеливаемое оптическое подавление нейронов с помощью протонных насосов, управляемых светом. Природа. 2010;463(7277):98–102.
КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый
Чуонг А.С., Мири М.Л., Бусскамп В., Мэтьюз Г.А., Акер Л.С., Соренсен А.Т., Янг А., Клапоэтке Н.К., Хеннингер М.А., Кодандарамайя С.Б. и др. Неинвазивное оптическое ингибирование микробным родопсином с красным смещением. Нат Нейроски. 2014;17(8):1123–9.
КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый
Wiegert JS, Mahn M, Prigge M, Printz Y, Yizhar O. Заглушение нейронов: инструменты, приложения и экспериментальные ограничения. Нейрон. 2017;95(3):504–29.
КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый
«>
Сабадич Дж., Варга С., Молнар Г., Олах С., Барзо П., Тамас Г. Возбуждающий эффект ГАМКергических аксо-аксональных клеток в корковых микросхемах. Наука. 2006;311(5758):233–5.
КАС пабмед Статья Google ученый
Цена GD, Trussell LO. Оценка концентрации хлоридов в центральном глутаматергическом терминале: исследование перфорированного пластыря грамицидина на чашечке Хельда. Дж. Нейроски. 2006;26(44):11432–6.
КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый
Ман М., Пригге М., Рон С., Леви Р., Ижар О. Биофизические ограничения оптогенетического торможения на пресинаптических окончаниях. Нат Нейроски. 2016;19(4):554–6.
КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый
Ким Дж.М., Хва Дж., Гаррига П. , Ривз П.Дж., РаджБхандари У.Л., Хорана Х.Г. Управляемая светом активация передачи сигналов бета-2-адренорецепторов химерным родопсином, содержащим цитоплазматические петли бета-2-адренорецепторов. Биохимия. 2005; 44(7):2284–9.2.
КАС пабмед Статья Google ученый
Airan RD, Thompson KR, Fenno LE, Bernstein H, Deisseroth K. Временно точный контроль внутриклеточной передачи сигналов in vivo. Природа. 2009; 458(7241):1025–9.
КАС пабмед Статья Google ученый
Zhang F, Vierock J, Yizhar O, Fenno LE, Tsunoda S, Kianianmomeni A, Prigge M, Berndt A, Cushman J, Polle J, et al. Семейство оптогенетических инструментов микробного опсина. Клетка. 2011;147(7):1446–57.
КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый
Хан Х, Бойден Э. С. Многоцветная оптическая активация, заглушение и десинхронизация нейронной активности с временным разрешением по одному пику. ПЛОС Один. 2007;2(3):e299.
ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый
Tonnesen J, Sorensen AT, Deisseroth K, Lundberg C, Kokaia M. Оптогенетический контроль эпилептиформной активности. Proc Natl Acad Sci U S A. 2009;106(29):12162–7.
КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый
Mattis J, Tye KM, Ferenczi EA, Ramakrishnan C, O’Shea DJ, Prakash R, Gunaydin LA, Hyun M, Fenno LE, Gradinaru V, et al. Принципы применения оптогенетических инструментов, полученных на основе прямого сравнительного анализа микробных опсинов. Нат Методы. 2011;9(2):159–72.
ПабМед ПабМед Центральный Статья КАС Google ученый
«>
Альфонса Х., Меррикс Э.М., Кодаду Н.К., Каннингем М.О., Дейссерот К., Ракка С., Тревельян А.Дж. Вклад повышенного внутринейронального хлорида в активность эпилептической сети. Дж. Нейроски. 2015;35(20):7715–26.
КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый
Бамберг Э., Титтор Дж., Остерхельт Д. Управляемая светом протонная или хлоридная накачка галородопсином. Proc Natl Acad Sci U S A. 1993;90(2):639–43.
КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый
Kummer M, Kirmse K, Witte OW, Holthoff K. Надежная идентификация in vivo как ГАМКергических, так и глутаматергических нейронов с использованием экспрессии флуоресцентного репортера, управляемого Emx1-Cre. Клеточный кальций. 2012;52(2):182–9.
КАС пабмед Статья Google ученый
«>
Флоссманн Т., Каас Т., Рахмати В., Кибель С.Дж., Витте О.В., Холтофф К., Кирмсе К. Интернейроны соматостатина способствуют нейрональной синхронности в гиппокампе новорожденных. Представитель ячейки 2019 г.;26(12):3173–82.
КАС пабмед Статья Google ученый
Канада С., Такегути Ю., Мураками М., Ихара К., Коуяма Т. Кристаллические структуры О-подобной синей формы и безанионной желтой формы галородопсина фараониса. Дж Мол Биол. 2011;413(1):162–76.
КАС пабмед Статья Google ученый
Раймондо Дж.В., Кей Л., Эллендер Т.Дж., Акерман С.Дж. Стратегии оптогенетического молчания различаются по своему влиянию на ингибирующую синаптическую передачу. Нат Нейроски. 2012;15(8):1102–4.
КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый
«>
Zhu L, Polley N, Mathews GC, Delpire E. NKCC1 и KCC2 предотвращают гипервозбудимость гиппокампа мыши. Эпилепсия Рез. 2008;79(2–3):201–12.
КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый
Бен-Ари Ю., Черубини Э., Коррадетти Р., Гайарса Дж.Л. Гигантские синаптические потенциалы в незрелых нейронах гиппокампа СА3 крысы. Дж. Физиол. 1989;416:303–25.
КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый
Джала В.И., Талос Д.М., Сдрулла Д.А., Брамбак А.С., Мэтьюз Г.К., Бенке Т.А., Делпир Э., Дженсен Ф.Е., Стейли К.Дж. Транспортер NKCC1 облегчает приступы в развивающемся мозге. Нат Мед. 2005;11(11):1205–13.
КАС пабмед Статья Google ученый
Сполярич А., Сея П., Сполярич И., Виртанен М.А., Линдфорс Дж. , Уваров П., Сумманен М., Кроу А.К., Сюэ Б., Пускарёв М. и др. Вазопрессин возбуждает интернейроны, чтобы подавить активность сети гиппокампа в широком диапазоне зрелости мозга при рождении. Proc Natl Acad Sci U S A. 2017;114(50):E10819–28.
КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый
Хегеманн П., Остербельт Д., Штайнер М. Фотоцикл хлоридного насоса галородопсина. I: катализируемое азидом депротонирование хромофора является побочной реакцией промежуточных продуктов фотоцикла, инактивирующих насос. EMBO J. 1985;4(9):2347–50.
КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый
Ланьи Дж.К. Механизм катализируемого основанием депротонирования основания Шиффа в галородопсине. Биохимия. 1986; 25(21):6706–11.
КАС пабмед Статья Google ученый
«>
Штайнер М., Остерхельт Д. Выделение и свойства нативного хромопротеина галородопсина. EMBO J. 1983; 2 (8): 1379–85.
КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый
Кояма Т., Канада С., Такегути Ю., Нарусава А., Мураками М., Ихара К. Кристаллическая структура хлорродопсина, управляемого светом, из Natronomonas pharaonis. Дж Мол Биол. 2010;396(3):564–79.
КАС пабмед Статья Google ученый
Варо Г., Браун Л.С., Сасаки Дж., Кандори Х., Маэда А., Нидлман Р., Ланьи Дж.К. Управляемый светом транспорт ионов хлорида галородопсином из Natronobacterium pharaonis. 1. Фотохимический цикл. Биохимия. 1995;34(44):14490–9.
КАС пабмед Статья Google ученый
Чижов И., Энгельхард М. Температурная и галогенидная зависимость фотоцикла галородопсина из Natronobacterium pharaonis. Биофиз Дж. 2001; 81 (3): 1600–12.
КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый
Меворат-Каплан К., Брумфельд В., Энгельхард М., Шевес М. Влияние анионов на фотоцикл галородопсина. Замещение хлорида формиат-анионом. Биохимия. 2005;44(43):14231–7.
КАС пабмед Статья Google ученый
Oesterhelt D, Hess B. Обратимый фотолиз пурпурного комплекса в пурпурной мембране Halobacterium halobium. Евр Дж Биохим. 1973;37(2):316–26.
КАС пабмед Статья Google ученый
Ormos P, Dancshazy Z, Karvaly B. Механизм генерации и регуляции фотопотенциала бактериородопсином в бимолекулярной липидной мембране. Биохим Биофиз Акта. 1978;503(2):304–15.
КАС пабмед Статья Google ученый
«>
Nagel G, Mockel B, Buldt G, Bamberg E. Функциональная экспрессия бактериородопсина в ооцитах позволяет прямое измерение зависимости от напряжения индуцированной светом перекачки H+. ФЭБС лат. 1995;377(2):263–6.
КАС пабмед Статья Google ученый
Kouyama T, Kawaguchi H, Nakanishi T, Kubo H, Murakami M. Кристаллические структуры состояний L1, L2, N и O галородопсина фараониса. Биофиз Дж. 2015; 108 (11): 2680–90.
КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый
Бедбрук К.Н., Ян К.К., Робинсон Дж.Е., Градинару В., Арнольд Ф.Х. Инженерия канала родопсина с помощью машинного обучения позволяет проводить минимально инвазивную оптогенетику. Нат Методы. 2019. Epub перед печатью. https://doi.org/10.1038/s41592-019-0583-8.
Арренберг А.Б., Дель Бене Ф., Байер Х. Оптический контроль поведения рыбок данио с помощью галородопсина. Proc Natl Acad Sci U S A. 2009;106(42):17968–73.
КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый
Оуэн С.Ф., Лю М.Х., Крайцер А.С. Температурные ограничения на оптогенетические манипуляции in vivo. Нат Нейроски. 2019;22(7):1061–5.
КАС пабмед Статья ПабМед Центральный Google ученый
Горски Дж.А., Тэлли Т., Цю М., Пуэльес Л., Рубинштейн Дж.Л., Джонс К.Р. Кортикальные возбуждающие нейроны и глия, но не ГАМКергические нейроны, продуцируются в экспрессирующей Emx1 линии. Дж. Нейроски. 2002;22(15):6309–14.
КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый
Мэдисен Л., Мао Т., Кох Х., Чжо Дж.М., Береньи А., Фудзисава С., Хсу Ю. В., Гарсия А.Дж. 3-й, Гу Х., Занелла С. и др. Набор инструментов Cre-зависимых оптогенетических трансгенных мышей для индуцированной светом активации и молчания. Нат Нейроски. 2012;15(5):793–802.
КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый
Танигути Х., Хе М., Ву П., Ким С., Пайк Р., Сугино К., Квициани Д., Фу Ю., Лу Дж., Линь Ю. и др. Ресурс драйверных линий Cre для генетического нацеливания на ГАМКергические нейроны в коре головного мозга. Нейрон. 2011;71(6):995–1013.
КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

Скачать ссылки

Благодарности

Благодарим Инну Ингриш за техническую помощь.

Финансирование

Эта работа была поддержана Приоритетной программой 1665 (HO 2156/3–2 до KH, KI 1816/1–2 до KK), Совместным исследовательским центром/Transregio 166 (B3 до KH, KK, A3 до GN) и Исследовательский отдел 3004 (KI 1816/5-1 to KK) Немецкого исследовательского фонда, а также Междисциплинарный центр клинических исследований Йены (KK, KH).

Информация об авторе

Примечания автора

Чуанцян Чжан, Шан Ян и Том Флоссманн внесли равный вклад в эту работу.
Кнут Холтхофф и Кнут Кирмзе совместно руководили этой работой.

Авторы и организации

Ганс-Бергер Отделение неврологии, Йенская университетская больница, Am Klinikum 1, 07747, Йена, Германия
Chuanqiang Zhang, Tom Flossmann,
Текущий адрес: Лаборатория сенсорной обработки, Институт мозга и разума, Факультет наук о жизни, Федеральная политехническая школа Лозанны (EPFL), CH-1015, Лозанна, Швейцария
Chuanqiang Zhang
Институт молекулярной физиологии растений и биофизики, Биоцентр и Институт физиологии – нейрофизиологии, Университет им.
Текущий адрес: Центр научных исследований в области мозга, биомедицинских наук, Эдинбургский университет, Эдинбург, EH8 9XD, UK
Tom Flossmann

Авторы

Chuanqiang Zhang
Просмотр публикаций автора
Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
Shang Yang
Просмотр публикаций автора
Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
Tom Flossmann
Просмотр публикаций автора
Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
Shiqiang Gao
Просмотр публикаций автора
Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
Otto W. Witte
Просмотр публикаций автора
Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
Georg Nagel
Просмотр публикаций автора
Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
Кнут Холтхофф
Посмотреть публикации автора
Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar
Knut Kirmse
Просмотр публикаций автора
Вы также можете искать этого автора в PubMed Google Scholar

Contributions

KK, KH, CZ и GN разработали исследование и разработали эксперименты. CZ, SY и TF выполнили эксперименты. CZ, SY, SG, TF и KK проанализировали данные. Все авторы внесли свой вклад в интерпретацию данных и подготовку рукописи. Все авторы прочитали и одобрили окончательный вариант рукописи.

Автор, ответственный за переписку

Переписка с Кнут Кирмзе.

Декларация этики

Одобрение этики и согласие на участие

Неприменимо.

Согласие на публикацию

Неприменимо.

Конкурирующие интересы

Авторы заявляют об отсутствии конкурирующих интересов.

Дополнительная информация

Примечание издателя

Springer Nature остается нейтральной в отношении юрисдикционных претензий в опубликованных картах и институциональной принадлежности.

Дополнительная информация

Дополнительный файл 1: Рисунок S1.
Костимуляция при 594 нм и 488 нм ослабляет инактивацию e Np HR3.0-опосредованных токов в интернейронах соматостатина (SOM). A, Образцы записей фиксации напряжения для отдельного интернейрона EYFP+ SOM в остром срезе, полученные из SOM ^IREScre :eNpHR3.0-EYFP ^{TX LSL мыши ( 0,5 мкМ). Клетка стимулировалась в течение 30 с либо непрерывно при 594 нм (5 мВт на конце волокна) или поочередно на 488/594 нм (1 кГц, рабочий цикл 50/50%, 5 мВт каждый на конце волокна). B, Количественное определение пика I и позднего I . C, Костимуляция синим светом существенно снижала инактивацию e Np HR3.0-опосредованных фототоков (P3–4). Данные представлены как среднее ± SEM. * P < 0,05, ** P < 0,01, *** P < 0,001. Набор данных был получен из ячеек, включенных в [28].}
Дополнительный файл 2: Рисунок S2.
Дифференциальные эффекты e Np HR3.0-опосредованной нагрузки хлоридами на сетевую активность в острых срезах гиппокампа. A, Временная динамика вспышек спонтанных постсинаптических токов (ПСТ) на P3–6. Вспышки ПСК практически отсутствовали в присутствии ингибитора NKCC1 буметанида (10 мкМ). Последующая фотостимуляция синим светом (60 с, 488 нм, 5 мВт) пирамидных клеток Emx1+ приводила к кратковременному повторному появлению всплесков ПСХ. B, Образцы записей фиксации напряжения из отдельной ячейки, показывающие всплески PSC (моменты времени, указанные в A). Обратите внимание, что всплески PSC снова появляются после фотостимуляции (нижняя кривая). C, Количественное определение количества пакетов за 20-секундные интервалы времени. D, Образец записи с фиксированным напряжением спонтанных ВПСТ, выделенных реверсивным потенциалом, до фотостимуляции (вверху), сразу после смещения фотостимуляции (488 нм, 5 мин, 5 мВт; в центре) и ~ 10 мин после фото — смещение стимуляции (внизу). E, Динамика частоты ВПСТ на P11–12 (нормализованная к среднему значению периода до стимуляции). Обратите внимание на долговременную стабильность частоты ВПСТ после фотостимуляции. Кратковременные перерывы в записи, используемые для мониторинга сопротивления доступу, не показаны для ясности F, Абсолютные частоты EPSC до и после фотостимуляции. Данные представлены как среднее ± SEM. нс – несущественно, ** P < 0,01.
Дополнительный файл 3.
Необработанные значения данных, используемые для статистических сравнений.
Права и разрешения
Открытый доступ Эта статья распространяется в соответствии с условиями международной лицензии Creative Commons Attribution 4.0 (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/), которая разрешает неограниченное использование, распространение, и воспроизведение на любом носителе, при условии, что вы укажете автора(ов) оригинала и источник, предоставите ссылку на лицензию Creative Commons и укажете, были ли внесены изменения. Отказ от права Creative Commons на общественное достояние (http://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/) применяется к данным, представленным в этой статье, если не указано иное.
Перепечатки и разрешения
Об этой статье
Dave Long Photo
Центральный и Западный Массачусетс
Центральный Массачусетс в основном состоит из холмов, лесов и ферм. Это район, где я живу. Хотя он не так известен, как некоторые другие районы штата, он имеет множество живописных возможностей вокруг водохранилищ Вачусетт и Куаббин. Западный Массачусетс — это прежде всего Беркширские горы. Я снял несколько водопадов в этом районе, но мне нужно изучить больше возможностей.
Tribute in Light 20th Anniversary
Fall Sunset at the Old Stone Church
Late Fall at the Old Stone Church
Fall at the Old Stone Church
Winter Wonderland
Старая каменная церковь Рождество
Рождество в Старой каменной церкви
Закат в Старой каменной церкви
Миллстрим Зима
Millstream
Groton From Gibbet Hill
St. Mark’s Church
St. Mark’s
Old Mill at Moore State Park
Winter at the Old Sawmill

Водяное колесо мельницы
Следы в тумане
Виадук Вустер
Зима на виадуке0572
Кейп-Код, Массачусетс
Красивый район Массачусетса с прекрасными пляжами вдоль залива с приливными бассейнами и песчаными образованиями. От Сэндвича до Провинстауна вы увидите впечатляющие скалы вдоль Национального побережья и, казалось бы, бесконечные дюны и культовую архитектуру Новой Англии.
Урожайная луна Нобска Лайт
Блю Дори
Сквитиг-Харбор
Снежная буря
Stilt House
Flag House
Dawn at the Dune Shacks
Dune Shack
Dune Shack
Thalassa — Shack 14
Old Harbor Life Saving Station
На скалах
Восход солнца в Вуд-Энде
Восход солнца в Вуд-Энде
Желтая Дори
Желтая Дори Отражение0572
The Boathouse at Salt Pond
Clam Trees at Rock Harbor
Clam Trees Reflection
Clam Trees Sunset
Low Tide at Rock Harbor
Boardwalk in Sandwich
Quahaug Fishing
Sandwich Boardwalk Ride
Milky Way Over Stage Harbour Light
Stage Harbour Sunrise
Nobska Light
Nobska Light Blue Hour
Falmouth Christmas
Quissett Dories
Brandt Point Storm
Nantucket Windmill
Vineyard Haven Dory
Гавань Винъярд-Хейвен
Остров Лоуренса
Наусет Голубой час
Гавань Хайаннис Восход солнца
Маяк Наусет Blue Hour
Бостон
Один из самых фотогеничных городов Северной Америки. Прекрасное сочетание колониальной архитектуры и архитектуры 21 века. От Норт-Энда до Бикон-Хилл и Бэк-Бэй Бостон сохраняет очарование и индивидуальность Новой Англии.
Восход солнца в Бостоне
Отражение реки Чарльз
От моста BU
Утренний ряд
Public Garden Sunset
Swan Boats Public Garden
Acorn Street
Acorn Street Christmas
Fan Pier
Boston Skyline From Harbor Walk
Under the Longfellow
Въезд в Бостон
Закат из парка Пирс
Мост Закима из парка Норт-Пойнт
Рынок Куинси
Moonset над финалом Zakim
Boston Pops на 4 -й
Boston Public Garden
Падение под мостом Tobin
Падение под мостом Tobin
FALL BRODE BRIDGE
. сочетание пригородов Бостона, таких как Марблхед и Хингхэм, которые обеспечивают красивую архитектуру и пейзажи береговой линии. Дальше находятся красивые прибрежные города, такие как Ньюберипорт и Даксбери. Среди них смешанные старые рыбацкие городки, такие как Глостер и Рокпорт, которые до сих пор поддерживают действующий флот и неподвластный времени образ жизни.
First Harbor Dory Sunset
Christmas Tree Dory
Moonrise Scituate Lighthouse
Moonrise Over Old Scituate Light
Scituate Harbor
Fort Pickering Lighthouse
Moonrise on Motif #1
Annisquam Light Up Close
Розовый дом
Розовый дом Восход солнца
Глостерская шхуна 1
Глостерская шхуна 2
Северный Нью-Гэмпшир
Все времена года прекрасны, но этот регион известен осенней листвой, особенно в Белых горах вдоль шоссе Канкамагус на южной стороне, а также вдоль небольшие сельские магистрали и проселочные дороги, соединяющие небольшие горные города.
Люпины в часовне Св. Матфея
Люпины Шугар-Хилл
Sugar Hill Lupines
Sugar Hill Sunset
Crawford Notch Depot Milky Way
4th Iron Trestle
Artist’s Bluff
Foggy Morning in Eaton, NH
Birches in Jackson
Maples of Sugar Hill, NH
Sabbaday Falls
Крытый мост The Flume
Southern New Hampshire
Южный Нью-Гэмпшир представляет собой смесь Озерного региона, холмистых сельскохозяйственных угодий и небольших промышленных городов, соединяющих штат с Атлантическим океаном вдоль изрезанной береговой линии протяженностью 18 миль.
Birch Path Spring
Birch Path Fall
Birch Path Winter
Moonset Over Portsmouth
Wonalancet Union Chapel
Wonalancet Union Chapel
White Mountain Church
Ashland, NH
Tannery Hill Covered Bridge
Harrisville, NH
Henniker Covered Bridge
Garwin Falls
Squam Lake Winter
Island House
meredith
Северный Вермонт
Причудливые деревни, спрятанные в горах, идеально подходят для пейзажей и живописных снимков Америки. Все времена года прекрасны, но этот регион известен осенней листвой, особенно в Зеленых горах, где шоссе 7 разделяет Вермонт прямо посередине.
Joe’s Pond
Lake Willoughby
Island Pond
The Round Church — Richmond
East Albany Church
Hillside Farm
Sunset AM Foster Covered Bridge
Стоу, Вермонт
Старый амбар в Стоу
Николс-Ледж
Вермонт Винтер
AM Foster Covered Bridge
Upper Cox Covered Bridge
Slaughter House Covered Bridge
Grandview Farm
East Topsham
East Corinth
Peacham, Vermont
Moss Glen Falls Stowe
Продажа тыкв в Stowe
Stannard Church
Randolph Barn
Lake Willoughby
Central Vermont
Winter Clearing
Road to Jenne Farm
Jenne Farm
Caper Hill Farm
Sleepy Hollow
Sleepy Hollow Farm
Ферма Мейпл Гроув
Мосс Глен Фолс Грэнвилл
Фэрли, Вермонт
Южный Мэн
Скалистая береговая линия, уединенные пляжи и город Портленд идеально подходят для пейзажной фотосъемки. Некоторые из самых красивых маяков в США усеивают скалистые выступы из Наббла и Портленд-Хед-Лайт, в то время как Оганквит и Олд-Орчард имеют глубокие плоские пляжи, тянущиеся на многие мили.
Portland Head Sunrise
Sunrise Portland Light
Path to Portland Head Light
Portland Light
Cathedral of Immaculate Conception
Winter Sunrise Fish Shack
Cape Porpoise Fish Shack
Cape Porpoise Fish Shack
Custom House Wharf
Sunrise Old Orchard Beach Pier
Пирс Олд-Орчард
Отлив Олд-Орчард-Бич
Дорис из Кеннебанкпорта
Лунный свет Наббл
Sunrise Nubble Light
Nubble Moonrise
Kennebunkport Harbor
Bald Head
Marginal Way
Mid-Coast Maine
Monhegan Island Sunrise
Маяк Sunrise Pemaquid Point
Pemaquid Milky Way
Pemaquid Sunset
Люпины в штате Мэн
Whitefield Lupines
Rockport Harbor
Curtis Island
Curtis Island Light
Fishing Shack
Marshall Point Lighthouse
Marshall Point Light
Winter Сансет
Бухта Макрел
Бутбей-Харбор
Канди-Харбор
Cundys Harbor
Doubling Point Light
Grounded at Bailey Island
Lookout Point
Southport
Camden Harbor
Downeast Maine
Jessup Path
Hemlock Path
Bass Harbour Sunset
Bass Harbour Winter
Jessup Path Winter
Stonington Fish Shack
Rhode Island
Rose Island Lighthouse
Newport Moon
Hobbit House
Point Judith Lighthouse
Castle Hill Lighthouse
Castle Hill
Goat Island Christmas
Salve Regina
Connecticut
Ясно, что штат Новой Англии, в котором я провел меньше всего времени, но я обнаружил некоторые настоящие сокровища, такие как подсолнухи на ферме Баттонвуд, кладбище домашних животных в государственном парке Харкнесс и маяк Old Saybrook
Old Saybrook Breakwater Light
Enders Falls
Saville Dam
Buttonwood Farm
Sunset Buttonwood Farm
Pet Cemetery
New Haven Lighthouse
New York
Top of the Rock
Tribute in Lights
Tribute in Lights (пано)
Бруклинский мостовой дань в свете
Дань в огнях Бруклин Сваинг
Внутри суда. был проведен в Северной Флориде в районе Сент-Огастин. Этот регион представляет собой прекрасное сочетание пляжей, дикой природы и истории.
Заход луны Маяк Святого Августина
Matanzas River
St. George Street
Sunrise Reflections
St. Johns Pier Sunrise
Sunrise St. Augustine Beach
Sunrise St. Augustine Fishing Pier
Ранний утренний прибой
Пирс Сент-Джонс
Под пирсом
Закат Луны
9 Перст Бога0572
Св. Августин Лайт
Sunrise St. augustin Лопес и Грейт-Кросс
Остров Большой Талбот
Кастильо-де-Сан-Маркос
Кастильо-де-Сан-Маркос Сансет
Moonset Saint Augustine
Bridge of Lions Sunrise
Bridge of Lions and St. Augustine
Bridge of Lions Sunset
Bridge of Lions
Bridge of Lions
Река Матансас
Львиный мост
Путь к пляжу
Shrimp Boat City
Музей Лайтнера
St. Mark’s Lighthouse
Donna Kay
Eastport Sunrise
Flagler Beach Pier
Florida Birds
Roseate Spoonbill
Roseate Spoonbill
Roseate Колпица
Строительство гнезда
Большая белая цапля
Птицы на лежбище
Великая пара Егрет
Здание Великого Егрета. Строительство гнезда
Ухаживание за большими белыми цаплями
Борьба с большими белыми цаплями
Пенсильвания и Западная Вирджиния
Если вы любитель водопадов, это место должно быть в вашем списке. Юго-западная Пенсильвания и Западная Вирджиния предлагают несколько красивых мест в горах.
Babcock State Park
Mail Pouch
Harrison Wrights Falls
Harrison Wrights Falls
Ganoga Falls
Ganoga Falls
Oneida Falls
Oneida Falls
Ф.Л. Ricketts Falls
Onondaga Falls
RB Ricketts Falls
Юго-восток США
Driftwood Beach Milky Way
Driftwood Beach
Driftwood Beach Milky Way
Bodie Island Lighthouse
Folly Island Pier
Sunrise Through the Pier
Old Sheldon Руины церкви
Плантация Томотли
Кладбище Бонавентура
Плантация Вормслоу
Magnolia Plantation
Road to Botany Bay
Tomotley Plantation
Avenue of Oaks
Colorado
Crystal Mill
Dancing Aspen
Aspen Gove 1
Аспен Гроув 2
Аспен Гроув 3
Аспен Гроув 4
Даллас Дивайд
Lost Highway
Ridgway
Окно города-призрака
Юго-запад США
Дом некоторых из самых известных национальных парков, включая Каньон, Гранд-Каньон, Гранд-Каньон, Арки, Арки, парки и живописные места. Большая часть географии находится в ведении Бюро по управлению земельными ресурсами (BLM), где расположены Волна и другие удивительные образования. Немногие районы мира предлагают столько возможностей для фото, как Аризона и Юта.
Walking Through the Wave
The Wave
Entering the Wave
Horseshoe Bend
Angels Landing
Zion Narrows
Zion Narrows
Thor’s Hammer
Сад Королевы
Вход в Верхний Каньон Антилопы
Нижний Каньон Антилопы
Blowing Sand Upper Antelope Canyon
Delicate Arch
Dead Horse Point
Mesa Arch
Monument Valley
Coral Pink Sand Dunes
Grand Canyon
Entering Волна II
Западная часть США
Немногие районы столь же красивы и разнообразны, как западная часть США, с многокилометровой живописной береговой линией, величественными горами и бескрайними пустынями. Два моих любимых национальных парка находятся в Калифорнии и очень отличаются друг от друга: Йосемити и Долина Смерти. На северо-западе Тихого океана есть все, от тропических лесов до высокой пустыни. Путешествуйте по Калифорнии, Орегону и Вашингтону, чтобы насладиться безграничным разнообразием ландшафтных возможностей.
Point Reyes Shipwreck
Valley View
Tunnel View
Upper Yosemite Falls
Late Fall in Yosemite
Lone Cypress
Mono Lake
Bodie Автомобиль
Восход Солнца
Водопад Пантер-Крик
Млечный Путь над горой Худ
Обломки Питера Иредейла
Palouse Falls
Steptoe Butte
Palous , рисовые террасы Лунцзи и города Гуйлинь и Гонконг/Вьетнам, где мы ездили в Ханой, Ниньбинь, Фонгня и залив Халонг
Ночная рыбалка
Casting the Net
Blackbeard
Blue Hour with the Cormorant Fisherman
Sunrise with the Cormorant Fisherman
Cormorant Fisherman
Getting Ready to Fish
Blackbeard
Карстовые горы
Торговец на рынке
Старуха на улице
Работа на рисовой террасе
Longji Rice Terrace
Guilin Pagoda
Hong Kong from Victoria Peak
Ha Long Bay
Iceland
The landscape photographer’s paradise with waterfalls, glaciers, geysers, volcanos, rugged coastlines и классные пляжи. Добавьте к этому очаровательную архитектуру, замечательных людей, лошадей и овец, куда бы вы ни посмотрели, и погоду, которая меняется с каждой минутой. С таким количеством больших и маленьких предметов, я надеюсь скоро вернуться.
Reynisdranger
Reynisdranger
Sun Voyager
Bruarfoss
Bruarfoss
Vestrahorn Beach
Vestrahorn Beach
Iceberg Beach
Vestrahorn Beach
Ingjaldsholskirkja
Черная церковь
Черная церковь
Seljalandsfoss
Seljalandsfoss
Kirkjufell
Kirkjufell
Icelandic Lupines
Church in Vik
Church in Vik
Vik i Myrdal
Hofskirkja
Церковь в Хвалснесе
Гульфосс
Скогафосс
Халльгримскиркья
Iceland Horses
Abandoned Boat Hvalsnes
Stafnesvegur Light
France & Italy
Valensole Dawn
Valensole Trees
Valensole Trees II
Lavender Ряды
Валенсоль Санрайз
Валенсоль Млечный Путь
Аббатство Сенанк
Valensole Sunset
Valensole Field
Valensole Plateau
Manarola
Riomaggiore
Riomaggiore
Vernazza
Corniglia
Church of San Giorgio Маджоре
Сан-Грегорио
Голландия
Эта страна, наполненная ветряными мельницами, каналами, велосипедами и тюльпанами, является прекрасным местом для фотографирования.